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hTERT基因转染对雪旺细胞特性及功能影响的实验解析

一、引言

1.1研究背景与意义

随着人类寿命的延长和生活质量的提高，组织工程学和再生医学的发展受到了广泛的关注。在组织工程学中，构建功能性组织或器官需要大量具有特定功能的细胞，然而，许多原代细胞在体外培养时增殖能力有限，且随着传代次数的增加会逐渐衰老，这限制了它们在组织工程中的应用。在再生医学领域，细胞治疗是一种极具潜力的治疗策略，例如，对于神经损伤患者，通过移植具有修复功能的细胞来促进神经再生和功能恢复是一个重要的研究方向，但细胞的有限寿命和增殖能力同样制约了这一治疗方法的发展。

人类端粒酶逆转录酶（hTERT）是一种具有逆转录酶活性的蛋白质，控制着染色体末端的端粒长度，从而调节细胞寿命和增殖。端粒是位于染色体末端的一段DNA序列，可以随着细胞增殖而逐渐缩短，当端粒长度到达极限，细胞进入凋亡期，这个现象被称为“细胞老化”。hTERT基因能够逆转“细胞老化”的现象，通过表达hTERT，细胞可以维持端粒的长度，从而延长细胞寿命并增强增殖能力。因此，hTERT基因在组织工程学和再生医学领域具有潜在的应用前景。若能通过hTERT基因转染使细胞获得永生化，将为组织工程提供充足的种子细胞，同时也能为再生医学中的细胞治疗提供更多的可能性，推动这些领域的发展，为解决临床疾病治疗难题提供新的思路和方法。

1.2雪旺细胞概述

雪旺细胞是神经嵴的衍生物，形成了周围神经髓磷脂轴突的髓鞘，分别环绕在周围神经轴突的轴上，沿着轴突节形成一层髓磷脂髓鞘。雪旺细胞对周围神经的发育、功能和再生起着至关重要的作用。在周围神经发育过程中，雪旺细胞从神经嵴迁移到周围神经部位，并分化为成熟的雪旺细胞，参与神经纤维的形成和髓鞘的构建。当轴突受损时，雪旺细胞环绕其周围帮助消化轴突，随后留下连续的雪旺细胞形成一个空的管道，为新的轴突生长提供引导和支持。此外，雪旺细胞还能分泌多种神经营养因子，如神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）等，这些因子对于维持神经元的存活、促进轴突的生长和再生具有重要意义。

然而，雪旺细胞在体外培养时面临着一些问题。体外培养的雪旺细胞增殖能力有限，通常在经过有限次分裂后会停止增殖，发生衰老和凋亡，这大大影响了科研上对细胞培养技术的进一步应用。例如，在进行神经损伤修复的研究中，需要大量的雪旺细胞用于细胞移植或构建神经组织工程支架，但由于雪旺细胞的增殖限制，难以获得足够数量的细胞，限制了相关研究和治疗方法的发展。而且，雪旺细胞在体外培养时还容易受到成纤维细胞等杂质细胞的污染，进一步影响了其培养效果和应用价值。

1.3hTERT基因研究现状

hTERT基因通过激活端粒酶活性来稳定端粒长度和消除衰老屏障，对细胞永生化和恶性转化至关重要。在大多数可持续分裂增殖的肿瘤和癌细胞中，hTERT基因/端粒酶活性持续性高表达，其表达增加导致端粒酶活性增强，从而维持端粒稳定。研究表明，将hTERT基因导入目的细胞染色体DNA中，可上调其表达，稳定端粒长度，促使细胞发生永生化，表达hTERT基因的细胞通常表现接近正常二倍体的核型，也可维持正常细胞的生理特性，如生长速率、核型、无致瘤性和接触生长抑制性等，因而是一种非常理想的建立永生化细胞系的方法。

在不同细胞类型中，hTERT基因的研究都取得了一定进展。在成纤维细胞中，转染hTERT基因可使其增殖能力增强，衰老延迟，并且能够维持细胞的正常生物学功能。在间充质干细胞中，hTERT基因的导入也能延长细胞的寿命，提高其多向分化潜能，使其在组织工程和再生医学中的应用更具潜力。然而，hTERT基因在雪旺细胞中的研究相对较少，目前对于hTERT基因转染雪旺细胞后对其生长特性、增殖能力、细胞功能及相关分子机制的影响尚不完全清楚，有待进一步深入研究。

1.4研究目的与内容

本实验旨在探究hTERT基因转染对雪旺细胞生长特性、增殖能力、细胞功能及相关分子机制的影响。具体研究内容如下：

采用质粒转染技术将hTERT基因转染入雪旺细胞中，并对转染后的细胞进行筛选和鉴定，确保hTERT基因成功导入雪旺细胞。

观察雪旺细胞在hTERT基因干预下的生长特性，包括细胞形态、生长曲线等，分析hTERT基因对雪旺细胞生长的影响。

检测雪旺细胞在hTERT基因转染后的增殖能力，通过MTT法、EdU法等实验方法，探究hTERT基因是否能够增强雪旺细胞的增殖能力。

研究hTERT基因转染对雪旺细胞功能的影响，检测雪旺细胞分泌神经营养因子的能力以及对神经元生长的支持作用等，评估hTERT基因转染对雪旺细胞在神经修复中功能的改变。

分析hTERT基因在雪旺细胞中的表达情况，并进一步探究