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面试病理研究员时关于切片技术的问题库

一、基础理论题（共5题，每题6分）

1.题：简述病理切片制作的基本流程及其各步骤的关键点。

2.题：解释苏木精-伊红（HE）染色法的原理及其在病理诊断中的应用价值。

3.题：比较石蜡包埋法和冰冻包埋法在病理切片制作中的优缺点及其适用场景。

4.题：说明病理切片中“切片厚度”对诊断结果的影响，并列举常见的切片厚度标准。

5.题：描述病理切片质量控制的常用指标，并举例说明如何通过质量控制确保切片有效性。

答案与解析

1.答案：病理切片制作流程包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、脱蜡、染色、脱水、封片等步骤。关键点：①固定需快速、充分，以保持组织形态；②脱水需逐步进行，避免组织收缩变形；③切片厚度需均匀（通常4-5μm），以保证显微镜观察效果；④染色需控制时间与浓度，确保细胞结构清晰。

解析：此流程是病理切片制作的标准化操作，每个步骤直接影响最终诊断结果。固定不当会导致组织自溶；脱水不彻底会引起切片皱缩；切片过厚或过薄都会影响观察。

2.答案：HE染色法利用苏木精（碱性染料，使细胞核染色）和伊红（酸性染料，使细胞质染色），通过组织脱水后脱蜡、染色、脱水、封片，使细胞结构清晰可见。其应用价值在于能反映细胞形态、组织结构及病理变化，是临床病理诊断的基础方法。

解析：HE染色法是病理诊断的“金标准”，广泛应用于肿瘤、炎症等疾病的形态学分析。染色原理基于染料与组织的离子相互作用，需严格掌握染色时间与pH值。

3.答案：石蜡包埋法优点是组织结构保存完整，适用于长期保存和复杂染色（如免疫组化）；缺点是操作耗时，易因温度变化导致组织收缩。冰冻包埋法优点是快速、适用于新鲜标本；缺点是组织易冰晶损伤，结构模糊。适用场景：石蜡法用于常规诊断；冰冻法用于急诊或特殊染色。

解析：两种方法的选择取决于诊断需求与标本特性。石蜡法更常用，但冰冻法在需快速出结果时不可替代。

4.答案：切片厚度影响显微镜观察的清晰度：过厚会导致视野模糊、层次不清；过薄易碎裂且背景干扰大。标准切片厚度为4-5μm，需通过切片机精确控制。

解析：切片厚度与观察效果成反比，需根据需求调整。例如，神经病理需更薄切片（2-3μm），而常规肿瘤诊断以4-5μm为宜。

5.答案：质量控制指标包括切片完整性（无断裂）、染色均匀性（细胞核与胞质对比度）、透明度（无气泡或油渍）、标签准确性等。可通过显微镜复检、标准化操作流程、设备校准等方式确保。

解析：质量控制是病理诊断的保障，不合格切片可能导致误诊。例如，染色不均会掩盖病变细节，需返工重做。

二、操作技能题（共8题，每题8分）

1.题：描述病理切片脱蜡过程中酒精浓度的变化顺序及其原因。

2.题：解释病理切片中“烤片”的目的及常见异常现象（如脱片、染色不均）。

3.题：说明如何处理切片过厚导致的显微镜观察模糊问题。

4.题：列举病理切片染色中常见的“染色过深”或“染色过浅”原因及纠正方法。

5.题：描述病理切片封片剂的选择标准及常用封片剂类型。

6.题：解释病理切片“卷曲”或“皱缩”的常见原因及预防措施。

7.题：说明病理切片数字化扫描的基本流程及对设备的要求。

8.题：描述病理切片保存的注意事项，包括温度、湿度、避光等条件。

答案与解析

1.答案：脱蜡顺序为：二甲苯（100%）→无水乙醇（100%）→95%乙醇→85%乙醇→75%乙醇，逐步降低酒精浓度以去除石蜡并使组织充分水化。原因在于酒精浓度梯度变化能防止组织收缩或产生气泡。

解析：脱蜡不彻底会导致染色困难，需严格按梯度操作；若跳步或浓度过高，组织易变形。

2.答案：烤片目的是使切片与载玻片牢固结合，防止脱片。异常现象：①脱片（烤片温度过高或时间过长）；②染色不均（烤片温度过低或时间不足）。

解析：烤片温度通常设为60-65℃，时间5-10分钟，需根据烤箱性能调整。

3.答案：可通过调整切片机刀片锋利度、降低进刀速度、重新包埋（减薄组织）解决。需检查切片厚度是否均匀。

解析：切片过厚是常见问题，需结合设备与操作优化。例如，使用锋利的切片刀可减少碎裂。

4.答案：染色过深原因：苏木精浓度过高、染色时间过长；染色过浅原因：苏木精浓度过低、染色时间过短。纠正方法：调整染色剂浓度、延长或缩短染色时间，并验证染液新鲜度。

解析：染色剂状态直接影响结果，需定期检测染液pH值与稳定性。

5.答案：选择标准：①透明度高（便于观察）；②封片时间长（防干涸）；③化学性质稳定（不与染料反应）。常用类型：中性树胶、DPX、甘油封片剂。

解析：封片剂需长期保存切片，中性树胶最常用，但甘油易吸水需避光保存。

6.答案：原因：①脱水不彻底（残留水分导致收缩）；②包埋时组织含水量过高。