PCR技术原理与临床应用.pptxVIP

PCR技术

目录

二、PCR技术基本原理

三、PCR技术在临床的应用

一、PCR概念

聚合酶链反应（PCR）：又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法。能使人们在几小时内从试管中获得大量的特异的核酸片段。临床实验室主要用于对病毒、细菌、支原体及其它病原体的检测

二、PCR技术基本原理

PCR是在试管中进行的DNA复制反应，基本原理与细胞内DNA的复制基本相似。每一次循环复制包括3个步骤：

变性

退火

延伸

二、PCR技术基本原理

变性（denature）

通过加热至95℃左右，使DNA双螺旋的氢键断裂，形成DNA单链模板而游离于反应体系中，此过程称为变性

二、PCR技术基本原理

退火（annealing）

即在较低的温度(40～70℃)下使加入的引物与待扩增的DNA区域特异性结合，以提供DNA复制起始的3’-OH端

二、PCR技术基本原理

延伸（extension）

即在适当的温度下（70℃～75℃），DNA聚合酶特异性结合到DNA模板上的引物的3’-OH端，以dNTP为反应原料，以靶序列为模板，根据碱基互补配对原则，进行DNA链的延伸，即合成DNA新链

二、PCR技术基本原理

上述3个步骤反复循环，使得特定长度的靶DNA数量呈指数上升。在理论上，终产物DNA的量可用Yn=X·2n计算

二、PCR技术基本原理

模板就是被复制的核酸片段

引物是PCR特异性反应的关键，为化学合成的寡核苷酸

可稳定核苷酸和提高TaqDNA聚合酶的活性,MgCl2浓度一般为1.5mmol/L为宜

在扩增过程中，当温度上升至72℃时，反应体系的pH在7.2左右。

其它反应因素

引物

模板

镁离子浓度

即dNTP为dATP、dCTP、dGTP和dTTP四种脱氧核苷三磷酸的混合物

脱氧核苷三磷酸（dNTP）

催化DNA合成，即在模板指导下，以dNTP为原料，使DNA链沿5′→3′方向延伸

TaqDNA聚合酶

三、PCR反应技术在临床的应用

人类遗传疾病的诊断与研究，如地中海贫血、血友病、苯丙酮尿症等致病基因的检测

病原体的检测，包括细菌、病毒、支原体、衣原体以及原虫等的检测，用于传染病的诊断、变异株分析、流行病学研究

肿瘤检测，如检测白血病、淋巴瘤、消化道肿瘤等细胞基因的改变

其他，如优生检测、法医学等

谢谢观看！