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2025年科研助理科研实验操作考核试题及答案解析

一、单项选择题（每题2分，共20分）

1.配制100mL0.1mol/LTris-HCl缓冲液（pH8.0）时，需称取Tris固体（M=121.14g/mol）的质量为：

A.0.121g

B.1.211g

C.12.114g

D.0.012g

2.使用微量移液器（量程20-200μL）吸取150μL液体时，正确操作是：

A.直接按压至第一档刻度，垂直插入液面2mm，缓慢松开按钮

B.先按压至第二档刻度排出空气，再插入液面吸取至第一档

C.倾斜45°插入液面5mm，快速松开按钮完成吸液

D.吸液后竖直移液器，直接按压至第二档排出全部液体

3.高压蒸汽灭菌时，若锅内冷空气未排尽，最可能导致的结果是：

A.灭菌时间延长

B.实际温度低于设定温度

C.仪器压力异常升高

D.培养基成分破坏

4.普通光学显微镜观察HeLa细胞时，若视野模糊且亮度不足，优先调整的结构是：

A.物镜转换至更高倍数

B.调节粗准焦螺旋后使用细准焦螺旋

C.增大聚光器光圈并调整反光镜角度

D.旋转目镜上的屈光度调节环

5.PCR实验中，若扩增产物出现非特异性条带，最可能的原因是：

A.模板DNA浓度过低

B.Taq酶添加量不足

C.退火温度过低

D.dNTP浓度过高

6.测定蛋白质浓度时，使用Bradford法比色，若比色皿外壁有液体残留，会导致：

A.吸光度值偏低

B.吸光度值偏高

C.标准曲线斜率增大

D.结果无显著影响

7.细胞传代时，胰酶消化过度最可能导致：

A.细胞贴壁能力增强

B.细胞膜完整性破坏

C.细胞增殖速度加快

D.培养基pH显著升高

8.高效液相色谱（HPLC）分析样品前，流动相需经过的关键处理步骤是：

A.超声脱气30分钟

B.高温灭菌15分钟

C.过滤至0.45μm孔径

D.调节pH至中性

9.微生物划线分离时，正确的操作顺序是：

①灼烧接种环至红热，冷却

②取菌后在平板边缘划第一条线

③灼烧接种环，冷却后从第一条线末端划第二条线

④重复③操作完成三区域划线

A.①→②→③→④

B.②→①→③→④

C.①→③→②→④

D.②→③→①→④

10.实验室发生浓硫酸（98%）溅到手臂皮肤时，正确的应急处理是：

A.立即用大量清水冲洗15分钟，再涂2%碳酸氢钠溶液

B.先用干纱布轻轻吸去酸液，再用大量清水冲洗，最后涂碳酸氢钠溶液

C.直接涂抹氢氧化钠溶液中和

D.用酒精擦拭后包扎伤口

二、填空题（每空2分，共20分）

1.配制500mL0.5mol/LNaCl溶液（M=58.44g/mol）时，需称取NaCl固体______g（保留两位小数）；定容时需将溶液转移至______中完成。

2.超速离心机使用时，离心管需______放置于转子中，且对称位置的离心管______（填“质量”或“体积”）需一致。

3.分光光度计测定吸光度时，空白对照的作用是______；若使用紫外光区（260nm）测定，应选择______材质的比色皿。

4.细菌培养时，LB固体培养基需添加______作为凝固剂；37℃培养箱中培养需保持______（填“需氧”或“厌氧”）环境。

5.免疫荧光实验中，封闭步骤的目的是______；荧光显微镜观察时需避免______，防止荧光淬灭。

三、简答题（每题10分，共30分）

1.简述使用移液枪（量程10-100μL）吸取50μL液体的规范操作步骤，并说明“预洗”的作用。

2.设计一个验证“药物X对肝癌细胞HepG2增殖抑制作用”的实验方案（需包含实验分组、检测指标及关键操作要点）。

3.分析PCR实验中“扩增失败（无目的条带）”的可能原因，并提出对应的解决措施。

四、综合题（30分）

某实验室开展“纳米颗粒A对小鼠成纤维细胞（NIH/3T3）毒性”研究，实验步骤如下：

①复苏冻存的NIH/3T3细胞，用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养至对数期；

②配制纳米颗粒A的梯度浓度（0、5、10、20、40μg/mL），加入96孔板（每孔100μL培养基+100μL颗粒溶液）；

③消化对数期细胞，计数后以5×103个/孔接种于96孔板（每孔200μL），37℃、5%CO?培养24h；

④吸去培养基，每孔加入10μLCCK-8试剂和100μL无血清培养基，继续培养2h