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非洲猪瘟实验室培训

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目录

01

引言与背景

02

病原学基础

03

实验室诊断方法

04

安全规范与操作

05

实操培训模块

06

总结与应用

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引言与背景

非洲猪瘟病毒概述

病毒特性与分类

非洲猪瘟病毒（ASFV）属于非洲猪瘟病毒科的唯一成员，是一种大型双链DNA病毒，具有极强的环境抵抗力和复杂的基因组结构，可分为24个基因型，不同毒株的致病性差异显著。

传播途径与宿主范围

全球流行现状

主要通过直接接触感染猪、软蜱叮咬、污染的饲料或交通工具传播，家猪和野猪是主要易感宿主，但病毒不感染人类，属于严格的动物传染病。

自2018年传入亚洲后，非洲猪瘟对全球养猪业造成毁灭性打击，中国、越南等国家因疫情导致生猪存栏量骤减，经济损失超千亿美元，目前尚无商业化疫苗可用。

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通过理论授课与实操结合，使学员掌握ASFV的病原学特征、诊断技术（如PCR、ELISA）、生物安全三级实验室（BSL-3）操作规范及疫情应急处置流程。

培训目标与范围

核心能力培养

课程内容参照OIE（世界动物卫生组织）和FAO（联合国粮农组织）的非洲猪瘟防控指南，涵盖样本采集、病毒分离、分子分型等全流程技术要点。

国际标准对标

强化兽医、疾控、养殖场等多部门协同防控能力，包括疫情报告制度、扑杀补偿机制及无害化处理技术等政策法规解读。

跨部门协作意识

模块化教学体系

由国家级ASFV参考实验室首席科学家、流行病学教授及一线防控专家联合授课，确保技术权威性与实战性。

专家团队配置

考核与认证机制

学员需通过笔试（病毒学知识）、实操（核酸提取与检测）及模拟疫情处置三部分考核，合格者颁发OIE认可的实验员资质证书。

分为基础理论（4学时）、实验室诊断技术（12学时）、现场防控演练（8学时）三大模块，采用案例研讨、虚拟仿真等多元化教学手段。

课程结构介绍

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病原学基础

2014

病毒特性与分类

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病毒结构与形态特征

非洲猪瘟病毒（ASFV）属于非洲猪瘟病毒科的唯一成员，为双链DNA病毒，直径约200纳米，具有二十面体对称的衣壳结构，外层包裹脂质囊膜，对理化因素抵抗力强。

基因型多样性

根据p72基因序列可分为24个基因型，其中基因型Ⅱ在我国流行，其毒力变异范围从高致死率到低致病性不等，需通过全基因组测序进行精准分型。

宿主特异性与细胞嗜性

严格感染猪科动物（家猪和野猪），主要靶向单核-巨噬细胞系统，病毒在细胞质内复制，可诱导细胞凋亡并逃避免疫监视。

抗原特性与血清型

目前已知8个血清群，但各血清型间交叉保护性差，这是疫苗研发的主要障碍，病毒编码的CD2v蛋白是重要的免疫逃逸因子。

直接接触传播

通过感染猪的血液、组织液、排泄物等直接接触传播，病毒在康复猪体内可持续带毒长达6个月，成为潜在传染源。

媒介生物传播

钝缘软蜱是重要的生物媒介，病毒可在蜱体内复制并经卵传播，形成自然疫源地，蜱叮咬传播效率高达90%以上。

污染物间接传播

病毒在环境中稳定性极强，可在冻肉中存活数年，通过污染的饲料、车辆、器具等机械传播，需严格执行生物安全措施。

气溶胶传播

在密闭空间内可通过短距离气溶胶传播，特别是在高病毒载量的急性感染期，养殖场需加强空气过滤系统建设。

传播机制与途径

流行病学特征

时空分布规律

呈现明显的地理聚集性，非洲为原发地，欧洲、亚洲相继暴发，我国呈现点状散发、区域性流行特点，雨季发病率显著升高。

流行株变异监测

当前流行毒株以基因Ⅱ型强毒株为主，但监测发现部分自然弱毒株的出现，需通过ORF基因缺失检测鉴别野毒与疫苗毒。

跨物种传播风险

虽然主要感染猪只，但近期研究发现某些蜱种可感染人类细胞系，提示需要加强人畜共患病风险评估与监测预警。

持续感染与潜伏期

潜伏期4-19天不等，亚急性感染猪可成为隐蔽传播源，需采用qPCR与ELISA联合检测以提高早期诊断率。

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实验室诊断方法

样本采集与预处理

样本类型选择

优先采集脾脏、淋巴结、肾脏等高病毒载量组织，同时需兼顾血液、血清及环境拭子样本，确保检测覆盖全面性。样本需低温保存并避免反复冻融，以维持病毒核酸完整性。

生物安全处理

所有样本需在BSL-3级实验室环境下操作，使用专用密封容器运输，严格遵循灭活程序（如56℃加热30分钟）以降低感染风险。操作人员需穿戴防护服、口罩及护目镜。

样本均质化与核酸提取

组织样本需经机械研磨或酶消化处理，采用酚-氯仿法或商业化试剂盒提取病毒RNA/DNA，确保提取效率并避免抑制剂残留影响后续检测。

分子检测技术

等温扩增技术（LAMP）

利用BstDNA聚合酶在恒温条件下扩增靶序列，通过浊度或荧光信号判读结果。适合基层实验室快速诊断，但需注意引物设计和交叉污染控制。

全基因组测序

采用高通量测序平台（如Illumi