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林木根际解磷菌有机酸分泌基因启动子功能验证双荧光素酶代码试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.双荧光素酶报告基因检测中，常用的内参荧光素酶是（）

A.萤火虫荧光素酶B.海肾荧光素酶C.水母荧光素酶

答案：B

2.验证基因启动子功能，构建载体时启动子应位于（）

A.报告基因上游B.报告基因下游C.报告基因内部

答案：A

3.提取解磷菌基因组DNA常用的方法是（）

A.煮沸法B.CTAB法C.SDS法

答案：B

4.用于扩增有机酸分泌基因启动子的技术是（）

A.PCRB.RT-PCRC.Southernblot

答案：A

5.转化大肠杆菌感受态细胞常用的方法是（）

A.热激法B.电穿孔法C.化学转化法

答案：A

6.筛选含有重组载体的大肠杆菌菌落，常用的筛选标记是（）

A.氨苄青霉素抗性B.卡那霉素抗性C.四环素抗性

答案：A

7.双荧光素酶检测时，细胞裂解液的作用是（）

A.裂解细胞释放荧光素酶B.激活荧光素酶C.稳定荧光素酶

答案：A

8.构建重组载体时，使用的工具酶不包括（）

A.限制性内切酶B.DNA连接酶C.反转录酶

答案：C

9.荧光素酶发光的原理是（）

A.氧化反应B.还原反应C.水解反应

答案：A

10.检测双荧光素酶活性的仪器是（）

A.酶标仪B.荧光定量PCR仪C.凝胶成像系统

答案：A

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.以下属于解磷菌有机酸分泌的有（）

A.柠檬酸B.苹果酸C.草酸D.乳酸

答案：ABC

2.构建启动子双荧光素酶报告载体需要的元件有（）

A.启动子序列B.荧光素酶基因C.终止子D.筛选标记基因

答案：ABCD

3.影响双荧光素酶检测结果的因素有（）

A.细胞转染效率B.荧光素酶底物浓度C.检测时间D.细胞密度

答案：ABCD

4.验证启动子功能的方法有（）

A.双荧光素酶报告基因检测B.基因敲除C.过表达D.凝胶迁移实验

答案：ABCD

5.常用的大肠杆菌感受态细胞制备方法有（）

A.CaCl?法B.电击法C.热激法D.化学修饰法

答案：AB

6.用于检测重组载体是否构建成功的方法有（）

A.酶切鉴定B.PCR鉴定C.测序鉴定D.表达鉴定

答案：ABC

7.荧光素酶的优点包括（）

A.灵敏度高B.线性范围广C.检测快速D.背景低

答案：ABCD

8.在基因工程中，载体应具备的条件有（）

A.有复制原点B.有多个限制性内切酶位点C.有筛选标记D.能携带外源基因

答案：ABCD

9.提取解磷菌RNA时，需要注意的事项有（）

A.防止RNA酶污染B.低温操作C.选择合适的提取试剂D.去除DNA污染

答案：ABCD

10.以下哪些技术可用于分析启动子活性变化（）

A.实时荧光定量PCRB.WesternblotC.双荧光素酶报告基因检测D.EMSA

答案：ACD

三、判断题（每题2分，共10题）

1.双荧光素酶报告基因检测只能用于验证启动子功能。（×）

2.海肾荧光素酶的发光强度通常比萤火虫荧光素酶弱。（√）

3.构建载体时，限制性内切酶的选择只需要考虑识别位点。（×）

4.解磷菌的有机酸分泌与磷的活化有密切关系。（√）

5.细胞转染效率对双荧光素酶检测结果没有影响。（×）

6.重组载体构建成功后，无需进行测序验证。（×）

7.荧光素酶活性可以直接反映启动子的活性。（√）

8.提取基因组DNA时，EDTA的作用是抑制DNA酶活性。（√）

9.电穿孔法转化大肠杆菌感受态细胞效率低于热激法。（×）

10.双荧光素酶检测中，底物加入量越多越好。（×）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述双荧光素酶报告基因检测的基本原理。

答案：将待研究的启动子序列构建到含有荧光素酶基因的载体上，与内参荧光素酶载体共转染细胞，通过检测两种荧光素酶的活性，以内参校正，从而反映启动子的活性。

2.构建重组载体时，如何确保外源片段正确插入载体？

答案：选择合适的限制性内切酶，使载体和外源片段产生匹配的粘性末端或平末端。连接后，通过酶切鉴定、PCR鉴定和测序鉴定来验证插入的正确性。

3.简述解磷菌有机酸分泌基因启动子功能验证的意义。

答