桑树抗青枯病鉴定技术规程.docxVIP

Q/LB.□XXXXX-XXXX

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ICS

FORMTEXT65.020

CCS

FORMTEXTGXAS

FORMTEXTB47

团体标准

T/FORMTEXTGXASFORMTEXTXXXX—FORMTEXTXXXX

FORMTEXT?????

FORMTEXT桑树抗青枯病鉴定技术规程

FORMTEXTTechnicalProtocolforIdentificationofResistanceLevelstoBacterialWiltinMulberry

FORMDROPDOWN

FORMTEXT（本草案完成时间：2025年6月）

FORMDROPDOWN

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT广西标准化协会??发布

STYLEREF标准文件_文件编号T/GXASXXXX—XXXX

STYLEREF标准文件_文件编号T/GXASXXXX—XXXX

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前言

本文件参照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由广西壮族自治区蚕业技术推广站提出并宣贯。

本文件由广西标准化协会归口。

本文件起草单位：广西壮族自治区蚕业技术推广站、百色市蚕业站、广西南宁天龙生物科技有限公司。

本文件主要起草人：刘丹、林强、邱长玉、曾燕蓉、黄胜、蒋满贵、陆晓媚、莫荣利、张朝华、文柳璎、陈小青、赵潇、朱光书、于永霞、何国玲、石华月、黄飞、冉艳萍、李莉、莫愁、黄丽萍、李福乐、蓝黄丽。

桑树抗青枯病鉴定技术规程

范围

本文件确立了利用水循环装置快速鉴定桑树青枯病抗性等级的术语和定义、并规定了材料设备、试验步骤、抗性等级划分及数据处理等内容。

本文件适用于桑树品种（系）对青枯病（Ralstoniasolanacearum）的抗性等级鉴定，为抗病品种筛选提供技术依据。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T1464.35植物病害鉴定技术规程

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

桑树青枯病Mulberrybacterialwilt

由青枯菌（Ralstoniasolanacearum）引起的土传病害，主要通过根系侵染，导致植株叶片萎蔫、枯死。

病情指数Diseaseindex,DI

反映植株发病程度的量化指标，通过各病情级别植株数计算得出，计算公式为：

DI=(

式中：

-s为各病情级别的代表数值（0-4级，对应0-4分）；

-n为各病情级别的植株数；

-N为调查总植株数；

-S为最高病情级别代表数值（4分）。

水循环装置Watercirculationdevice

由水箱、水槽、种植板、水泵及管道组成的闭合循环系统，用于水培桑苗并均匀分布菌液，维持青枯菌活性。

方法原理

通过水循环装置对伤根处理的桑苗进行水培，接种青枯病菌后，在可控环境下观察植株发病症状，计算病情指数，依据抗性等级标准划分免疫、高抗、抗病、中抗、感病、高感6个等级。

材料与设备

材料

所需材料如下：

待测桑苗：生长健壮、粗细一致，株长25-35cm。

青枯病菌株：经活化培养的致病菌株，工作浓度1-5×10?cfu/mL。

培养基：LB培养基（对照组使用）。

试剂：无菌水、营养液（MS培养基，浓度10%）。

设备

所需设备如下：

水循环装置：含水槽、种植板（带种植孔）、灯管，可层叠设置（推荐3层）。

水箱：通过管道与水槽连接，配备水泵驱动水培液循环。

环境控制设备：恒温恒湿培养箱（温度28-30℃，相对湿度＞90%）。

检测工具：显微镜、细菌计数板、pH计、溶解氧检测仪。

试验步骤

桑苗预处理（S1）

桑苗预处理步骤如下：

清洗：去除桑苗根部泥土，用无菌水冲洗3次。

预培养：将桑苗植入水循环装置，用无菌水培养10-20d，至新叶长出，剔除自然发病苗木。

伤根处理：修剪根系末端，造成轻微损伤，促进病菌侵染。

接种与培养（S2）

青枯病病原菌接种与培养步骤如下：

分组：设置试验组（接种青枯病菌）和对照组（添加等体积LB培养基）。

菌液制备：青枯菌用LB培养基培养至对数生长期，离心后重悬，调整浓度至