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n层析法也称色谱法(chromatography)，是1906
年俄国植物学家MichaelTswett发现并命名的。他
将植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子，各
种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被
分开，由此得名为“色谱法”。
n1941年，英国生物学家Martin和Synge首先
提出了色谱塔板理论，为后来各种色谱技术的发
展奠定了基础。
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n层析法最基本的特征是有一个固定相和一个
流动相，当两相作相对运动时，由于混合物
中各组分在物理化学性质(如吸附力、溶解
度、分子的形状与大小、分子的电荷性及亲
和力等)上的差别，使各组分在两相间进行
反复多次的分配而得到分离。
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层析类别主要依据的理化性质此类的层析方法举例
吸附层析吸附力磷酸钙凝胶层析
分配层析分配系数各种薄层层析、纸上层析
离子交换层析分子的电荷性、极性DEAE-纤维素柱层析
凝胶过滤层析分子大小交联葡聚糖柱层析
亲和层析亲和分子间的亲和力
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n层析技术可按两相的状态不同进行分类，如以
气体为流动相的叫做气相层析（gas
chromatography），以液体为流动相的叫做
液相层析（liquidchromatography）。
n由于固定相也有液体和固体的不同，故气相层
析还可细分为气—液和气—固层析两种，同理，
液相层析即可细分为液液和液固层析两种。
——
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n根据流动相的形式：
n液相层析、气相层析
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层析基本操作过程
n
装置选择上样和洗脱结果检测
基质均匀性上样均一性目的不同
柱层析的比值
L/d洗脱装置检测方法不同
活性检测
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4、层析装置的仪器化
v与微机、质谱等连用
nHPLC
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层析前蛋白质处理
n主要是利用盐析法、等电点沉淀、
有机溶剂沉淀等方法，使目的蛋白与其
它较大量的杂蛋白分开，这些方法的特
点是简便、处理量大、既能除去大量杂
质，又能浓缩蛋白质，但分辨率低。
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第一节凝胶过滤层析技术
n又称凝胶排阻层析或分子筛方法
n利用某些化学惰性的多孔网状结构的物质(多
为凝胶)为填料，使混合物中的各种物质按其
分子大小不同得到分离。
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n优点：凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条
件比较温和，温度范围广，不需要有机溶剂，分离效果好
n缺点：样品被不断稀释，上样量不能太大，否则分辨率变
差
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一、凝胶过滤层析的基本原理
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