遗传修饰动物模型.pptVIP

遗传修饰动物模型演示文稿;;;;;;1、第一例嵌合体小鼠

1974年最早把猿猴病毒40(SV40)注入小鼠囊胚腔中得到部分组织中含有SV40DNA的嵌合体小鼠。但无任何表型改变。

2、第一个转基因小鼠系

1976年建立了世界上第一个转基因小鼠系，这些小鼠基因组中插人了莫氏白血病病毒基因。他们是运用反转录病毒与小鼠卵裂球共培养把外源DNA插入到小鼠的基因组中。

3、第一例显微注射法产生转基因小鼠

1980年，Gordn等把SV40DNA显微注射到小鼠受精卵的原核中，获得了两只转基因小鼠，创建了显微注射转基因方法。

;4、“超级鼠”1982年，Palmiter和Brinster用此方法把大鼠的生长激素基因导入小鼠受精卵，获得了成年体重是对照组小鼠2倍的“超级鼠”，首先证明外源基因可在受体中表达，并且表达产物具有生物活性。

5、转基因家畜的产生转基因家兔、绵羊和猪(Hammer等，1985)、牛(Bondioli等，1988)和山羊(Ebert等，1991)等相继出世。;*;*;6、利用转基因生产重组蛋白

1987年，Simons等在转基因小鼠的乳汁中得到绵羊的β-球蛋白，1988年，该研究小组又从转基因绵羊的乳汁中得到了α-抗胰蛋白酶。目前，已有数十种蛋白实现了转基因生产。

7、转YAC的转基因小鼠

近10年内，陆续出现用全长酵母人工染色体（YAC）DNA来产生转基因小鼠。

;东北农业大学－国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪

绿色荧光蛋白－猪胎儿成纤维细胞－克隆

;1987年，世界上第一只商业化转基因绵羊在英国著名的罗斯林研究所诞生。转基因母羊的乳汁中可以分泌α-抗胰蛋白酶。;2010年，FDA批准转基因鲑鱼;;（l）疾病型转基因动物

替代：

避免了人体实验造成的风险和伦理问题。

潜伏期长，病程长和发病率低的疾病

可控：

品系，感染病原体

实验环境

方便：

样品收集

结果分析容易（统计）；

人畜共患病比较，研究疾病机理

;（2）利用转基因动物制药：

生物反应器重组蛋白药物

欧洲医药评价署人用医药产品委员会2006年6月2日首次批准了用转基因山羊奶研制而成的抗血栓药物Atryn（抗凝血酶）上市

目前世界上还有利用转基因绵羊、牛和兔乳腺生物反应器生产的人α-抗胰蛋白酶（抗蛋白酶缺乏性肺气肿药???）、重组组织血纤维蛋白溶酶原激活剂（抗栓药）和人C1抑制剂（治疗血管神经性水肿的药物）等重组蛋白药物也已经完成或进入临床Ⅲ期试验，特别是治疗性抗体药物，发展潜力更大。

;目前已在下列动物的乳汁中生产出一些人类蛋白质药物：

牛：抗凝血酶、纤维蛋白原、人血清白蛋白、胶原蛋白、乳铁蛋白、糖基转移酶、蛋白C等；

山羊：抗凝血酶原、抗胰蛋白酶、血清白蛋白、组织纤溶原激活因子、单克隆抗体等；

绵羊：抗胰蛋白酶、凝血因子Ⅸ、蛋白C；

猪：凝血因子Ⅸ、蛋白C、纤维蛋白原、血红蛋白。;;;目的基因的分离与克隆;构建转基因载体;;转基因动物的技术路线(续);?转基因动物的技术路线（续）;?转基因动物的技术路线（续）;;;;;;;;*;;绝缘子元件阻断邻近增强子的活性

;;;*;*;*;;;;*;*;*;;;;;;;operationpanel;显微注射法

显微注射法是在显微注射仪上，一侧用吸管固定受精卵，另一侧将注射针插入受精卵原核（一般是雄原核）。拔出显微注射针解除固定管的负压，操作完成。

;*;;;EventsDuringTransgenesis;;*;;*;;*;计算时间;;*;*;用透明质酸酶处理受精卵细胞团;*;;;*;;*;*;在体视显微镜下观察输卵管伞，并用移卵管吸取胚胎，次序为石蜡油、空气泡1、培养液、空气泡2、胚胎(尽可能少带入培养液)。空气泡3、培养液。;*;;;;;*;*;*;;;;;*;囊胚固定;;;;;;;*;*;;*;;*;;;;;ψ;;;;;;;*;;*;;;;外源DNA导入精细胞的方法有DNA与精子共育法、电穿孔导入法、脂质体转染法。;;;;;;*;*;;;;*;;;;;;;;;*;;G0代;;;;;;;三种技术的融合;;;;*;;;;通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。;;;;;;*;;;*;*;*;二者主要区别在于线性化位点不同。置换型载体的线性化位点在同源臂的外侧，插入型载体的线性化位点在同源臂序列的内部。;;;如何获得剔除小鼠?-剔除目的基因;Positive-NegativeSelectionVector;通用型打靶载体;;;;;;;;*;普通“正负筛选”置换型基因打靶载体;;;⑶正向选择法

;;如何获得剔除小鼠?－胚胎工程;简要过程;;;*;;;;;;