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基于ISSR和SQS基因解析甘草酸含量变异的遗传密码

一、引言

1.1研究背景与意义

甘草（Glycyrrhiza）作为豆科甘草属多年生草本植物，是一种在医药、食品、化妆品等领域广泛应用的重要资源。在传统中医药领域，甘草的应用历史源远流长，《神农本草经》将其列为上品，称其“味甘，平。主五脏六府寒热邪气，坚筋骨，长肌肉，倍力，金疮肿，解毒”。现代医学研究进一步揭示了甘草的多种药用价值，其主要活性成分包括甘草酸、甘草黄酮、甘草多糖等。其中，甘草酸（Glycyrrhizicacid），又称甘草甜素，是甘草的标志性成分，具有抗炎、抗病毒、保肝、调节免疫等多种药理活性。在临床上，甘草酸被广泛用于治疗肝炎、呼吸道感染、胃溃疡等多种疾病，其制剂如复方甘草酸苷注射液、甘草酸二铵肠溶胶囊等在肝病治疗中发挥着重要作用。在食品工业中，甘草酸因其高甜度、低热量的特性，被用作天然甜味剂，广泛应用于饮料、糖果、调味品等产品中，不仅能增加甜味，还能赋予产品独特的风味和保健功能。在化妆品领域，甘草酸的抗炎、美白、抗氧化等功效使其成为众多护肤品的重要原料，有助于改善肌肤炎症、色斑、老化等问题。

随着对甘草需求的不断增加，野生甘草资源因过度采挖而日益枯竭，人工栽培甘草成为满足市场需求的主要途径。然而，人工栽培甘草存在着品质不稳定的问题，其中甘草酸含量的变异是影响甘草质量的关键因素。甘草酸含量的高低直接关系到甘草的药用价值和经济价值，含量过低则无法满足药用和工业生产的要求。研究甘草酸含量变异的机制，对于提高甘草的质量控制水平、选育高甘草酸含量的优良品种具有重要的现实意义。通过深入了解甘草酸含量变异的内在机制，可以为甘草的规范化种植提供科学依据，优化种植技术和管理措施，提高甘草酸的含量和稳定性。同时，筛选和培育高甘草酸含量的甘草品种，能够增强甘草在市场上的竞争力，推动甘草产业的可持续发展，对于保障医药、食品等行业的原料供应和质量安全也具有重要作用。

1.2国内外研究现状

在甘草酸含量变异研究方面，国内外学者已开展了大量工作。早期研究主要集中在环境因素对甘草酸含量的影响，包括不同产地的土壤质地、酸碱度、肥力，以及气候条件如光照、温度、降水等。研究发现，甘草酸含量在不同产地间存在显著差异，例如，新疆、内蒙古等地的甘草，由于其独特的地理环境和气候条件，甘草酸含量相对较高。不同生长年限、采收季节对甘草酸含量也有明显影响，一般来说，生长年限较长的甘草，其甘草酸含量相对较高；秋季采收的甘草，甘草酸含量往往高于其他季节。近年来，遗传因素对甘草酸含量变异的影响逐渐受到关注。研究表明，甘草不同种群、个体间存在遗传差异，这些差异与甘草酸含量变异密切相关。通过对甘草群体遗传结构的分析，发现遗传多样性丰富的群体中，甘草酸含量的变异范围也较大。然而，目前对于甘草酸含量变异的遗传机制研究仍不够深入，尤其是在基因层面的研究还存在许多空白。

ISSR（Inter-SimpleSequenceRepeat）分子标记技术作为一种高效、简便的分子标记方法，在植物遗传多样性研究中得到了广泛应用。ISSR技术基于PCR扩增，利用引物与基因组中简单重复序列间的互补配对，扩增出不同长度的DNA片段，从而揭示DNA序列的多态性。在甘草研究中，ISSR技术已被用于分析甘草种群的遗传多样性、亲缘关系和遗传结构。通过ISSR分析，能够有效区分不同地理来源的甘草种群，为甘草种质资源的鉴定和保护提供了有力工具。然而，将ISSR技术与甘草酸含量变异相结合的研究还相对较少，尚未系统地揭示ISSR标记与甘草酸含量之间的关联。

SQS（Squalenesynthase）基因，即鲨烯合酶基因，是甘草酸生物合成途径中的关键基因。鲨烯合酶催化两分子法尼基焦磷酸（FPP）缩合形成鲨烯，鲨烯是三萜类化合物合成的重要前体物质，而甘草酸属于三萜皂苷类化合物，因此SQS基因在甘草酸合成中起着至关重要的作用。目前，对于SQS基因的研究主要集中在基因克隆、序列分析和表达调控方面。已有研究成功克隆了甘草SQS基因，并对其序列特征进行了分析，发现不同甘草品种的SQS基因序列存在一定差异。在表达调控方面，研究发现环境因素如光照、温度、激素等可以影响SQS基因的表达，进而影响甘草酸的合成。然而，SQS基因的多态性与甘草酸含量变异之间的关系尚未明确，需要进一步深入研究。

1.3研究目标与内容

本研究旨在深入揭示基于ISSR和SQS基因的甘草酸含量变异机制，为甘草的质量控制和品种选育提供坚实的理论基础和技术支持。

在ISSR遗传多样性与甘草酸含量关联分析方面，将采集来自不同地理区域的甘草样本，利用ISSR分子标记技术对这些样本的基因组DNA