抗生素微生物检定法.ppt

0个（cp2000)1个（cp2005）22个（cp2010)比浊法第92页，共134页，星期日，2025年，2月5日比浊法定义基本原理应用举例操作步骤注意事项检定的影响因素比浊法的特点和仪器第93页，共134页，星期日，2025年，2月5日1.比浊法的定义中国药典2005年版的定义：本法系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法。第94页，共134页，星期日，2025年，2月5日2.检定原理基本原理：细菌接种于澄清的营养丰富的液体培养基中，在一定的温度下培养一段时间，变浑浊，其浑浊程度与细菌数的增加、细菌群体质量的增加和细菌群体细胞容积的增大之间存在着直接的关系。当一定的光束照射其已经浑浊的液体培养基时，通过测定其透过率就知道细菌生长情况，在一定的抗生素浓度范围内，剂量响应为一直线。因此，在剂量响应曲线的直线范围内，可设计比浊法测定抗生素含量。第95页，共134页，星期日，2025年，2月5日2.检定原理细菌的群体生长期的选择：细菌的群体生长的整个变化过程大致可划分为如下阶段或时期：（A）诱导期（延滞期）（B）对数生长期（C）稳定期（D）死亡期第96页，共134页，星期日，2025年，2月5日2.检定原理(A)诱导期（延滞期）：本阶段为增殖准备期，细胞处于适应时期，本阶段时间的长短受多种因素的影响。当培养基营养丰富，新鲜，培养条件适宜，接种的培养物又具有很强的活力时，时间将会缩短，反之，则时间延长。本阶段内各种酶合成旺盛，体积增大。(B)对数生长期：在诱导期后，细胞经过适应、恢复，在提供足够的营养物质条件下，细胞数呈对数生长速率，此时，细菌细胞数的增长率是细胞数、基质的浓度与抑菌物质浓度三者的函数。在对数生长期中细胞数的增长率一般是一个常数。第97页，共134页，星期日，2025年，2月5日2.检定原理（C）稳定期：本阶段细胞增长率逐步下降到零，一部分细胞繁殖、生长，另一部分细胞死亡，趋于平衡。（D）死亡期：细菌细胞的死亡率超过增长率，细胞总数开始减少，主要是营养物质的缺乏、代谢产物的毒性、自溶酶的产生而导致细菌细胞溶解或死亡。第98页，共134页，星期日，2025年，2月5日2.检定原理测定时间的选择剂量－反应平稳生长时间段：一定抗生素浓度范围内，检定菌在单位时间内的生长速度相同，即生长速率相同，也就是在一段时间内反应－培养时间(A-t)呈显著的直线关系，且在不同抗生素浓度下的生长速率也相同。第99页，共134页，星期日，2025年，2月5日3.应用举例第100页，共134页，星期日，2025年，2月5日中国药典硫酸庆大霉素二剂量法实验条件双碟的制备：将双碟置于水平面上，加底层培养基20ml，待凝固后，加菌层培养基5ml，凝固后备用。菌层培养基中菌悬液的量约为培养基量的2%。加菌悬液的量可视抑菌圈大小及清晰程度进行调节。第60页，共134页，星期日，2025年，2月5日称样量的计算按标准品的标识效价、供试品的标识量或估计效价计算称样量：第61页，共134页，星期日，2025年，2月5日中国药典硫酸庆大霉素二剂量法操作步骤：标准品溶液的制备：假设：硫酸庆大霉素标准品的效价为636单位/mg，理论计算应精密称取78.62mg，置50ml量瓶（636单位/mg×78.62mg≈50000单位）中，恰好为1000单位，但实际操作中一般称量数接近即可，如精密称取标准品80.10mg。第62页，共134页，星期日，2025年，2月5日中国药典硫酸庆大霉素二剂量法操作步骤：80.10mg[水]50ml制成1018.87单位/ml①精密量取①5mlbuffer50ml制成101.887单位/ml②精密量取②5mlbuffer50ml制成10.189单位/ml精密量取②5mlbuffer100ml制成5.094单位/ml庆大霉素2～12单位/ml第63页，共134页，星期日，2025年，2月5日中国药典硫酸庆大霉素二剂量法操作步骤：供试品溶液的制备（原料）：根据硫酸庆大霉素原料的估计效价计算供试品的称样量。假设：供试品的估计效价为590单位/mg，则称样量为50000/590=84.74mg，但实际取样量为84.24mg，第一步称样置50ml量瓶中，实际估计效价为80.10mg×636u/mg/84