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褪黑素对细菌脂多糖诱导胎鼠脑细胞钙超载的神经保护效应探究

一、引言

1.1研究背景

在当今医学领域，脑损伤机制的研究一直是热点且具有挑战性的课题。科研人员通过大量在体和离体实验研究，提出了众多关于脑损伤机制的学说。其中，钙超载在脑损伤机制中占据关键地位。有研究表明，在缺氧状态下，神经元会释放更多兴奋性氨基酸类递质，这些递质作用于突触后膜上的N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体，进而促使细胞外钙内流，最终导致细胞内钙增加，引发神经元缺氧损伤。钙作为人体内含量仅次于碳、氮、氢、氧的第五位重要元素，99%以无机物形式存在于骨骼、牙齿等组织，仅1%存在于细胞内外。在细胞内，50%的钙存在于胞核内，30%在线粒体内，19.5%存在于内质网或结合在细胞膜上，仅有极少部分以与重碳酸、乳酸、磷酸等螯合的复合物形式存在，其中Ca2?占40%。神经细胞内钙离子的含量维持着高的电化学梯度，这种梯度依赖于细胞对钙的主动排出和细胞膜对钙的相对无通透性来维持。1992年，Schurr等人在体外实验中发现，Ca2?超载假说最能解释缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后神经元死亡的机制，其他机制大多是通过Ca2?超载对神经细胞造成损伤。如今，细胞内钙离子内环境稳定的破坏已被公认为是围产期HIBD的主要原因，缺氧缺血后神经元和神经胶质细胞内过度的Ca2?积聚被视为细胞死亡的最后共同通路。对于胎鼠而言，细胞内钙超载同样是其脑细胞损伤机制的重要环节，深入研究这一环节对于理解胎鼠脑损伤的发生发展具有重要意义。

1.2褪黑素研究进展

褪黑素是一种主要由松果体合成和分泌的内源性神经激素。它在人体的众多结构和生理系统中发挥着关键作用，除了作为人体生物钟的主要调节物质外，还具有多方面的生理作用。在神经系统方面，褪黑素具有镇静、催眠、镇痛、抗抑郁等作用，能够有效改善睡眠质量；在调节神经功能上，一方面，它作用于神经功能的一般方面，包括神经传递和突触可塑性、神经营养、神经保护（抗氧化、抗炎、DNA稳定和修复、神经发生）和神经可塑性（神经发育、神经干细胞增殖、神经元成熟、树突发生和轴突发生）；另一方面，通过调节特定功能，如昼夜节律和季节节律、生殖、能量代谢、睡眠、血压等发挥作用。近年来，大量研究表明褪黑素具有显著的神经保护作用，在多种神经退行性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病，以及缺血性损伤和神经毒性等方面的研究中取得了令人瞩目的成果。在阿尔茨海默病的研究中发现，褪黑素能够有效减少细胞内的氧化物质积累，降低氧化应激对神经胶质细胞和神经元的损伤，同时抑制细胞凋亡，减少神经胶质细胞和神经元的程序性死亡，维持细胞数量和功能的稳定；还能调节炎症相关信号通路，减少炎症因子的释放，从而减轻神经炎症对大脑组织的损害；此外，它能够抑制Aβ的纤维形成，阻止Aβ聚集形成具有神经毒性的纤维状结构，调节淀粉样前体蛋白的代谢过程，减少Aβ的产生，从源头上减轻Aβ对大脑的危害。这些作用为褪黑素在神经保护领域的应用提供了有力的理论支持。

1.3细菌脂多糖与脑损伤关系

细菌脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，当进入机体后，会引发一系列的免疫反应和病理变化。在对胎鼠的研究中发现，LPS对胎鼠脑细胞具有严重的损害作用。当给妊娠第19天SD孕鼠腹腔注射细菌脂多糖后，会导致胎鼠脑细胞内游离钙的变化。相关实验表明，随着注药后观察时间的延长，脑细胞钙离子荧光值于6h开始明显上升，12h达到高峰，各时间点均明显高于对照组。这表明LPS能够诱导胎鼠脑细胞内钙离子超载，进而导致脑损伤。其可能的机制是LPS激活了相关的信号通路，使得细胞膜对钙离子的通透性增加，细胞外钙大量内流，打破了细胞内钙离子的稳态平衡。过多的钙离子在细胞内积聚，激活了蛋白酶、DNA酶、磷脂酶等多种降解酶，这些酶的激活导致生物膜破坏，氨基酸代谢产物引起血管收缩，进一步加重缺血，最终导致脑细胞损伤。

1.4研究目的和意义

本研究旨在深入探究褪黑素在细菌脂多糖引起胎鼠脑细胞钙超载中的神经保护作用。新生儿缺血缺氧性脑病（HIE）严重威胁着新生儿的生命健康，是新生儿期后病残儿中常见的病因之一。目前，虽然对HIE的发病机制有了一定的认识，但仍缺乏有效的治疗手段。鉴于钙超载在胎鼠脑细胞损伤中的关键作用，以及褪黑素在神经保护方面的潜在价值，本研究通过给妊娠第19天SD孕鼠腹腔注射细菌脂多糖，观察褪黑素对急性分离胎鼠脑细胞内游离钙的影响，探讨褪黑素对脑损伤的保护作用。这一研究不仅有助于深入理解褪黑素的神经保护机制，为其在神经保护领域的应用提供更坚实的理论基础，也有望为新生儿缺血缺氧性脑病的治疗提供新的思路和策略，对改善新生儿的预后和生活质量具有重要的临床意义。

二、材料