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基于VIGS技术解析小麦抗病候选基因功能及机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

小麦作为全球最重要的粮食作物之一，为超过三分之一的世界人口提供主食，在保障全球粮食安全中扮演着举足轻重的角色。在中国，小麦也是主要的口粮作物，其产量和质量直接关系到国家的粮食供应和人民的生活稳定。然而，小麦生产面临着诸多挑战，其中病害的威胁尤为严重。

小麦条锈病是由小麦条锈菌引起的一种气传性真菌病害，具有流行性强、传播速度快的特点。在适宜的气候条件下，条锈菌可以通过气流远距离传播，迅速在大面积麦区扩散，导致小麦叶片出现大量鲜黄色的夏孢子堆，严重影响小麦的光合作用和养分吸收，造成小麦减产甚至绝收。20世纪40年代至今，小麦条锈菌新小种不断出现，导致我国8批次的主栽小麦品种丧失抗病性，造成病害全国大流行，最严重的年份小麦减产60亿公斤，给粮食生产带来了巨大损失。

小麦赤霉病是由禾谷镰刀菌引起的世界性病害，被称为小麦的“癌症”。除了导致小麦产量大幅下降外，赤霉病还会产生真菌毒素，污染食品和饲料，严重威胁人畜健康。自2000年以来，全国曾有9年赤霉病发生面积超过5000万亩，其中2012年达1.7亿亩。在我国小麦种植区，通常采用化学方法抑制赤霉病的发生，但大量化学药品的使用不仅增加了生产成本，还破坏了生态环境，给食品安全带来潜在风险。

小麦白粉病是由白粉菌引起的常见病害，主要危害小麦叶片、叶鞘和茎秆，在叶片上形成白色粉状霉层，影响小麦的正常生长和发育。近年来，小麦白粉病在我国各麦区发生较为普遍，每年危害我国小麦达到一亿亩左右，严重影响小麦的产量和品质。

这些小麦病害的频繁发生和严重危害，对全球粮食安全构成了巨大威胁。培育和种植抗病品种是防治小麦病害最经济、有效和环保的措施，而深入研究小麦抗病基因的功能则是实现这一目标的关键。通过挖掘和利用小麦自身的抗病基因，可以培育出具有持久抗病性的小麦新品种，减少化学农药的使用，降低生产成本，保护生态环境，保障粮食安全。

病毒诱导的基因沉默（Virus-inducedgenesilencing，VIGS）技术作为一种快速、高效的基因功能研究工具，为小麦抗病基因的功能分析提供了新的途径。VIGS技术利用病毒载体携带目标基因片段，导入植物体内，引发植物对目标基因的沉默，从而通过观察植物表型的变化来推断目标基因的功能。与传统的基因功能研究方法相比，VIGS技术具有操作简单、周期短、无需遗传转化等优点，特别适用于基因组庞大、遗传转化困难的小麦等作物。在小麦基因功能研究中，VIGS技术已被广泛应用于抗病、抗逆、生长发育等多个领域。例如，通过VIGS技术沉默小麦中的TaWRKY24基因，发现其能够影响色氨酸代谢通路，进而参与小麦对茎基腐病的防御反应；沉默TaMYB93基因可导致小麦主根根系的平均曲率和最大凸包面积显著减小，表明该基因在调控小麦根系构型中发挥重要作用。因此，利用VIGS技术对小麦抗病候选基因进行功能分析，有助于深入了解小麦的抗病机制，为小麦抗病育种提供理论支持和基因资源，对于保障全球粮食安全具有重要的现实意义。

1.2小麦抗病基因研究进展

小麦抗病基因是小麦抵御病原菌侵染的关键因素，对其深入研究有助于揭示小麦抗病的分子机制，为小麦抗病育种提供坚实的理论基础。小麦抗病基因种类繁多，根据其编码蛋白的结构和功能，主要可分为以下几类：

NBS-LRR类抗病基因是小麦中最为常见的一类抗病基因，其编码的蛋白含有核苷酸结合位点（Nucleotide-bindingsite，NBS）和富含亮氨酸重复序列（Leucine-richrepeats，LRR）结构域。NBS结构域参与信号传导和能量代谢，LRR结构域则主要负责识别病原菌的效应子，二者协同作用，激活小麦的抗病反应。例如，小麦抗条锈病基因Yr84是由一对物理上紧密连锁、功能上协同作用的NLR（核苷酸结合-富含亮氨酸重复）基因——CNL和NL——共同介导的。其中，CNL作为“传感器”，负责持续监视病原菌效应子的入侵；NL则扮演“辅助者”的角色，在接收到来自CNL的信号后被激活，从而启动下游的免疫防御级联反应。

受体激酶类抗病基因编码的蛋白具有跨膜结构域和激酶结构域，能够感知病原菌的信号，并通过自身磷酸化将信号传递到细胞内，激活抗病相关基因的表达。如中国科学院遗传与发育生物学研究所刘志勇研究员与赵玉胜研究员团队合作克隆的野生二粒小麦来源的抗白粉病基因Pm36，其编码一个新型的具有跨膜结构域的串联激酶抗病蛋白WTK7-TM，对目前已知的所有小麦白粉菌表现高抗至免疫。

转录因子类抗病基因编码的转录因子能够结合到抗病相关基因的启动子区域，调控这些基因的表达，从而参与小