第十三章免疫细胞分离及表面标志检测.pptVIP

第十三章免疫细胞分离及表面标志检测;优选第十三章免疫细胞分离及表面标志检测ppt;免疫细胞的分离及检测;;细胞分离基本原理;;原理：外周血中各细胞的比重不同，PBMC的比重为1.075～1.090，红细胞和多核细胞分别为1.093和1.092，选择比重为1.077±0.001的介质，细胞与介质混合后离心，比重比介质大的红细胞和多核细胞沉降在下层，而PBMC位于Ficoll分离液上层。

;用1.077±0.001的分层液可分离人外周血单个核细胞;对分离介质的要求：对细胞无毒；

等渗；

与血浆和分离细胞不相溶；

有特定的比重。;方法学评价：分离得到的PBMC纯度可达９５％，

淋巴细胞占９０％～９５％；

操作简便；

易于无菌。

;二、淋巴细胞分离;利用单核细胞具有贴壁生长的特点，将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平培养瓶，37℃温箱静置1h，单核细胞将贴附于平皿壁上，而未贴壁的细胞几乎全为纯淋巴细胞。

橡皮棒刮下贴壁的细胞，可得纯单核细胞(无活性）。;利用单核细胞具有贴壁生长的特点，将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶SephadexG10的层析柱中，凡有黏附能力的细胞绝大部分被吸附而黏滞在柱层中，从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。;3.Percoll分离液法;三、T、B细胞和T细胞亚群

的分离;1.磁性微球分离法;第17页，共32页。;;流式细胞分析仪;;1.E花环沉降法（E受体/CD2与绵羊红细胞结合）;2.尼龙毛柱分离法;;四、不同细胞分离方法的综合评价;五、分离细胞的保存和活力检测;2.细胞活力测定

细胞活力常用活细胞占总细胞的百分比表示，细胞活力的测定常用的简便方法是台盼蓝(trypanblue)染色法。死细胞着色，染成蓝色；活细胞拒染。;一、T细胞表面标志的检测;;;CD19+CD5-;;谢谢大家！