基因工程酶学基础1.pptVIP

(1)裂口连接酶链式反应(P151)(2)不对称裂口连接酶链式反应返回第三章3.2.8连接策略1、匹配的粘性末端：２、平末端：３、不匹配的粘性末端：返回第三章第三节DNA聚合酶返回第三章DNA聚合酶：需要模板，有多种活性，催化1个个核苷酸在链的3’接上去

TaqDNA聚合酶：来自于嗜热的古细菌

逆转录酶：以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成一段与mRNA互补的DNA片段

末端核苷酸转移酶：需要模板三种活性，即5’-3’的聚合酶活性、5’-3’的核酸外切酶活性和3’-5’的核酸外切酶活性。3’-5’的外切活性比T4或T7聚合酶的相应活性低得多。3.3.1大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(PolⅠ)返回第三章√×√√√√返回第三章返回第三章枯草杆菌蛋白酶水解大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ全酶所得K1enow聚合酶仍具有5’-3’的聚合酶活性、3’-5’的核酸外切酶活性,但失去了全酶的5’-3’的核酸外切酶活性。在DNA分子克隆中，Klenow聚合酶的主要用途有：(1)修补经限制酶消化的DNA所形成的3’隐蔽末端(2)标记DNA片段的末端(3)cDNA克隆中的第二链cDNA的合成(4)DNA序列测定。3.3.2大肠杆菌DNA聚合酶ⅠK1enow片段返回第三章返回第三章从T4噬菌体感染的大肠杆菌中纯化。由噬菌体