《永福罗汉果脱毒种苗繁育技术规程》（征求意见稿）.docx

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永福罗汉果脱毒种苗繁育技术规程

1范围

本文件界定了永福罗汉果脱毒苗繁育技术的术语和定义，规定了脱毒原原种苗生产、脱毒原种苗生产、脱毒商品苗生产、贮存和运输等阶段的操作指示。

本文件适用于永福罗汉果脱毒种苗的繁育。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

脱毒苗原原种苗virus-freenucleusstock

通过茎尖组织培养、热处理等生物技术直接获得的，首次通过病毒检测确认脱毒的初始植株。3.2

脱毒苗原种苗virus-freeregisteredstock

由脱毒苗原原种苗作为起始材料，在组培室、高标准网室等严格隔离条件下，扩繁而来的后代。3.3

脱毒商品苗virus-freecertifiedstock

由脱毒苗原种苗经过一定程度的扩繁，达到市场销售标准，并确保其健康度和农艺性状仍保持在较高水平，直接用于农业生产的种苗。

4脱毒原原种苗生产

4.1培养基准备

4.1.1诱导培养基

配方为MS+BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖3％+琼脂0.35％～0.8％。

4.1.2继代培养基

配方为MS+BA（0.5～1.0）mg/L+IAA0.1mg/L+IBA0.5mg/L。

4.1.3生根培养基

配方为1/2MS+IBA1.0mg/L+0.1％活性炭。

4.2外植体选择与处理

4.2.1材料选择

在生长健壮、来花及时、挂果容易、果大整齐的优良品种和单株上采集枝条。选择叶片完整、叶芽饱满、无病虫害且未现蕾的藤蔓上剪取约50cm的嫩梢。

4.2.2消毒处理

在超净工作台中用无菌水冲洗外植体，冲洗完成后放入75％酒精溶液浸泡5s～10s，随后放入0.1%升汞溶液或2％次氯酸钠溶液消毒8min～10min，最后用无菌水冲洗4～5次备用。

4.3茎尖脱毒与培养

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4.3.1热处理

将试管苗置于38℃~39℃的光照培养箱中处理10d～15d。

4.3.2茎尖剥离

在超净工作台上切取0.2mm～0.5mm的茎尖分生组织进行培养。

4.3.3初代培养

将茎尖分生组织接种到诱导培养基，pH值5.8～6.0。培养条件为温度24℃~28℃,光照强度800Lx～1200Lx，每天光照12h～16h。

4.4病毒检测与鉴定

4.4.1电镜观察法

参见附录A.1。

4.4.2间接酶联免疫法

参见附录A.2。

4.5脱毒原原种苗保存

在无菌条件下，通过继代培养方式进行保存。保存环境温度为24℃~26℃,光照强度为1000Lx~2000Lx，每日光照12h，相对湿度为70％～85％。

5脱毒原种苗生产

5.1扩繁培养

将脱毒原原种苗转入继代培养基进行扩繁，温度控制在24℃~29℃,光照强度800Lx～1200Lx，每天光照12h。

5.2生根培养

当继代苗长至5cm～6cm时，可转入生根培养基诱导生根。前期暗培养5d，温度为25℃,湿度为85%;中后期逐渐增加光照至1500Lx～1800Lx，每日光照12h，温度为25℃~28℃,湿度为85％。

6脱毒商品苗生产

6.1炼苗

当组培生根苗根系长至约0.5cm，具3～4片叶，高5cm～6cm时，将组培瓶苗从培养室移至温室或大棚内，闭瓶炼苗7d～10d，遮光率50％～70％，让其逐渐适应外界环境。随后打开瓶盖，开瓶炼苗2d~3d，及时喷水保持湿度，防止萎蔫。

6.2移栽与管理

6.2.1基质准备

移栽基质需疏松、透气、排水良好且经过消毒。

6.2.2洗苗与处理

取出组培苗，洗净根部培养基。用500倍多菌灵溶液浸泡5s杀菌，再用800倍IBA溶液浸泡15min。

6.2.3移栽

将苗栽入口径6cm～7cm的营养杯中。栽后立即淋透定根水，并搭建小拱棚覆盖薄膜，湿度保持在85％以上。

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6.2.4苗期管理

6.2.4.1棚内温度维持在25℃~28℃,避免强光直射（初期遮阴＞70％），后期逐渐增加光照。

6.2.4.2成活后7d～10d，可开始喷施稀薄的平衡型水肥。

6.2.4.3定期喷洒杀菌剂和杀虫剂，预防病虫害。

6.3出圃条件与种苗质量

符合以下要求的种苗可出圃供大田定植：

——健壮，经过充分炼苗；

——叶色浓绿，茎秆粗壮，无任何病虫害症状和病毒病症状；

——苗高≥6cm；

——根系发达，白色或