流式细胞仪培训 (2).pptVIP

淋巴细胞CD抗原的流式细胞检测第30页，共57页，星期日，2025年，2月5日造血系统干细胞肿瘤干细胞间充质干细胞神经干细胞脂肪干细胞…………干细胞研究第31页，共57页，星期日，2025年，2月5日热门研究－(肿瘤)干细胞肿瘤组织无限制的增殖在于肿瘤干细胞的存在目前研究的肿瘤干细胞来源于前列腺、乳腺等肿瘤肿瘤干细胞数量稀少，常规方法很难检测目前研究发现，肿瘤干细胞和正常细胞在HOECHEST33342染料摄取方面有重大差别故流式细胞仪是分析和检测肿瘤干细胞的重要工具第32页，共57页，星期日，2025年，2月5日干细胞能表达ABCG2泵蛋白，在HOECHST33342染色时能将该染料泵出，因此分析不能被该染料染色的细胞群时可以发现一群不能染色的细胞既是干细胞，因此能够在众多肿瘤细胞中区分出肿瘤干细胞。肿瘤干细胞中的研究应用

-Hoechst33342sidepopulation第33页，共57页，星期日，2025年，2月5日HoechstHoechst+Vera.SidePopulationCells第34页，共57页，星期日，2025年，2月5日细胞凋亡研究1.鉴别凋亡与坏死:AnnexinⅤ/PI2.测定凋亡率:AnnexinⅤ、Apo2·7、TUNEL3.研究凋亡触发机制：Caspase、Fas及FasLbcl-2/bax4.多参数分析凋亡是趋势第35页，共57页，星期日，2025年，2月5日第36页，共57页，星期日，2025年，2月5日G1SphaseG2MG1121DNA含量DNA含量细胞周期时相G0/1G2/MS细胞数细胞周期分析第37页，共57页，星期日，2025年，2月5日PIEthidiumBromideAcridineOrangeDAPI(UVexcitable)Hoechst33342(viable,UVexcitable)不能主动进入细胞，需要固定打孔488nm激发为脂溶性，主动进入细胞UV激发常用的DNA染料第38页，共57页，星期日，2025年，2月5日DNA含量及细胞周期分析细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S，G2，M)的各个时期，DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki67、核增殖抗原（PCNA）等，对细胞周期进行精确的分期：G0、G1、S、G2、M.第39页，共57页，星期日，2025年，2月5日G0/G1SG2/M第40页，共57页，星期日，2025年，2月5日流式细胞仪分选电荷式分选是当前的主流分选模式高速分选是保证结果的基本条件高纯度和高活性是分选的基本要求可选的激光要多样化（空冷、水冷、固体；不同的波长；真正的紫外）提供多种分选流动室光路稳定，紫外激光功率大流式分选和磁珠分选的差别和联系第41页，共57页，星期日，2025年，2月5日第1页，共57页，星期日，2025年，2月5日主要内容流式细胞仪概述流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的应用检测的一般步骤第2页，共57页，星期日，2025年，2月5日一、流式细胞仪概述第3页，共57页，星期日，2025年，2月5日流式细胞仪种类BDFACSVantageBD-CaliburEpicsAltra第4页，共57页，星期日，2025年，2月5日EpicsAltraBeckmanCoulter第5页，共57页，星期日，2025年，2月5日流式细胞仪的定义流式细胞仪是指，使细胞（或其他粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号，对信号进行处理，并对各参数进行关联分析的一种仪器。第6页，共57页，星期日，2025年，2月5日利用流式细胞仪通过检测荧光信号来检测细胞或其它颗粒性物质（表面或胞浆或胞核）的物理、化学特性并通过这些特性对细胞或颗粒进行定量。检测表面标记物检测胞浆标记物检测胞核内标记物检测可溶性蛋白流式细胞术（FLOWCYTOMETRY）第7页，共57页，星期日，2025年，2月5日流式细胞仪的基本结构前向散射侧向散射第8页，共57页，星期日，2025年，2月5日流式细胞仪显微镜流动的细胞静止的细胞样本数量大数量少高速分选样本