也可用于测定葡萄糖含量1.PPTVIP

实验七碱性磷酸酶酶促反应动力学实验实验要求了解酶促反应动力学的研究内容及意义通过检测不同温度条件下AKP的活性，了解温度对酶活性的影响学习测定酶最适pH的方法，了解pH对酶活性的影响了解底物浓度对酶促反应速度的影响，学习测定米氏常数（Km）的原理和方法。实验原理酶促反应动力学是研究酶促反应速度以及影响此速度的各种因素的科学，如底物浓度、酶浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等，进行酶促反应动力学研究具有重要的理论和实践意义。酶的催化作用受温度的影响。当温度达到某一定值时，酶促反应达到最高峰，此温度称为酶的最适温度。酶的活力受环境pH的影响极为显著。通常只有在一定的pH范围内，酶才表现其催化活性，且在某一pH时，酶的活性才达最大值，称为最适pH值，不同酶的最适pH值不同。在温度、pH及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶的催化作用有很大的影响。一般情况下，当底物浓度很低时，酶促反应速度（V）随底物浓度（[S]）的增加而迅速增加；但当底物浓度继续增加时，反应速度的增加率就比较小；当底物浓度增加至某种程度时，反应速度达到一个极限值（Vm）。Km值是酶的一个特征常数，是反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。Km可以近似表示酶与底物的亲和力，测定Km是酶学研究的一个重要方法。实验内容1、温度对酶活性的影响2、pH对酶活性的影响3、底物浓度对酶活性的影响（Km的测定）实验结果1、比较各种温度对AKP酶活性的影响，确定其最适温度。2、比较各种pH对AKP酶活性的影响，确定其最适pH值。3、以酶活性单位代表各管中酶反应速度(v)作纵坐标，以底物浓度（[s]）为横坐标，连接各点，观察该图形的形状。以酶活性单位的倒数（1/v）为纵坐标，底物浓度的倒数（1/[s]）为横坐标，在坐标纸描出各点并连接，求该酶的Km值。实验八胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响实验要求了解胰岛素及肾上腺素调节机体血糖浓度的机理与效果学会制备无蛋白血滤液掌握磷钼酸比色法测定血糖的原理和方法实验一总糖的测定——蒽酮比色法实验要求掌握蒽酮比色定糖法的原理和方法掌握72型分光光度计的原理和操作方法学习通过制作标准曲线测定未知物含量的方法实验原理糖类在较高温度下经浓无机酸作用脱水产生糠醛或糠醛衍生物，可与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，颜色深浅与糖量成正比。本法多用于测定糖原含量，也可用于测定葡萄糖含量。实验内容与结果1、制作葡萄糖标准曲线2、测定样品含糖量计算100克小麦面粉中总糖含量实验二氨基酸的分离鉴定——纸层析法实验要求学习分配层析法的原理掌握氨基酸纸上层析的操作技术（包括点样、平衡、展层、显色及鉴定）实验原理纸层析法是以滤纸作支持物，纸纤维上的羟基具有亲水性，能吸附一层水作固定相，而与水不相混合的有机溶剂作流动相，因此利用分配层析原理，不同物质在两相间有不同的分配系数而在纸上移动的距离不同，即被分开。本实验分离的是混合氨基酸样品，层析之后用茚三酮试剂显色。实验内容与结果1、点样2、展层3、显色用铅笔描出显色斑点的形状，测其距离并计算各氨基酸的Rf值。实验三蛋白质的等电点测定及沉淀反应实验要求了解蛋白质的两性解离性质学习测定蛋白质等电点的一种方法通过实验加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识区分可逆沉淀反应及不可逆沉淀反应并了解其实用意义了解蛋白质变性及沉淀的关系一、蛋白质的等电点测定原理：蛋白质是两性电解质，其解离状态和程度受溶液的酸碱度影响。在等电点（pI）时，蛋白质的理化性质有变化，可利用性质的变化测定蛋白质pI。常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。本实验借观察在不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。操作：用醋酸和醋酸钠配制成各种不同pH值的缓冲液。向诸缓冲液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。二、蛋白质的沉淀反应原理：蛋白质是一类高分子化合物，分子大小已达胶体颗粒范围（1~100毫微米）,因此蛋白质在水溶液中具有胶体的性质。维持蛋白质胶体稳定的因素有两个：一是胶体颗粒所带的电荷，一是与介质水形成的水化膜。这种稳定性是有条件的、相对的，在一定物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷、脱水，甚至变性而丧失稳定因素，从溶液中析出，这种作用称为蛋白质的沉淀反应。蛋白质的沉淀反应可分为两类：1）可逆沉淀反应：如盐析作用，等电点沉淀蛋白质等。提纯蛋白质时，常用此类反应。2）不可逆沉淀反应：如重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超声波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀而析出。操作1．蛋白质的盐析作用2．重金属沉淀蛋白质3．有机酸沉淀蛋白质4．有机溶剂沉淀