分子生物学实验操作指南及模拟题解答.docxVIP

第PAGE页共NUMPAGES页

分子生物学实验操作指南及模拟题解答

一、选择题（共10题，每题2分，合计20分）

1.在PCR实验中，引物退火温度通常取决于什么因素？

A.引物长度

B.引物GC含量

C.引物Tm值

D.以上都是

2.DNA凝胶电泳中，DNA片段的迁移速度主要受什么影响？

A.电场强度

B.凝胶浓度

C.DNA片段大小

D.以上都是

3.在蛋白质印迹实验中，SDS电泳的主要作用是什么？

A.分离蛋白质

B.转移蛋白质到膜上

C.杂交探针

D.显色

4.基因克隆中，载体质粒通常需要具备哪些特性？

A.多克隆位点

B.抗生素抗性基因

C.复制起点

D.以上都是

5.RT-PCR实验中，逆转录酶的主要作用是什么？

A.将RNA逆转录为DNA

B.扩增DNA片段

C.建立RNA二级结构

D.以上都不是

6.亚克隆实验中，连接酶的作用是什么？

A.连接DNA片段

B.切割DNA片段

C.转录RNA

D.以上都不是

7.基因编辑技术CRISPR-Cas9中，Cas9蛋白的主要作用是什么？

A.识别靶向序列

B.切割DNA

C.修复DNA

D.以上都是

8.原核表达系统中，常用的启动子是什么？

A.T7启动子

B.CMV启动子

C.SV40启动子

D.以上都不是

9.在细胞培养实验中，培养基通常需要添加哪些成分？

A.胰岛素

B.胎牛血清

C.氨基酸

D.以上都是

10.流式细胞术主要用于什么分析？

A.细胞数量

B.细胞周期

C.细胞表面标志物

D.以上都是

二、填空题（共10题，每题1分，合计10分）

1.PCR实验中，退火温度通常设定在______和______之间。

2.DNA凝胶电泳中，DNA片段的迁移方向是______。

3.蛋白质印迹实验中，SDS电泳后，蛋白质被转移到______上。

4.基因克隆中，载体质粒的多克隆位点是指______。

5.RT-PCR实验中，逆转录酶的optimalpH值通常是______。

6.亚克隆实验中，连接酶的optimaltemperature是______。

7.CRISPR-Cas9技术中，gRNA的作用是______。

8.原核表达系统中，T7启动子通常与______结合。

9.细胞培养实验中，培养基的pH值通常维持在______。

10.流式细胞术的英文缩写是______。

三、简答题（共5题，每题4分，合计20分）

1.简述PCR实验的基本步骤。

2.解释DNA凝胶电泳的原理及其应用。

3.描述蛋白质印迹实验的基本流程。

4.说明基因克隆实验中，选择合适载体质粒的依据。

5.比较RT-PCR和PCR在实验原理和操作上的异同。

四、论述题（共2题，每题10分，合计20分）

1.详细说明基因编辑技术CRISPR-Cas9的原理及其应用前景。

2.讨论原核表达系统在蛋白质表达中的优势和局限性，并举例说明。

五、实验设计题（共1题，20分）

设计一个实验方案，用于检测某基因在特定细胞系中的表达水平。方案应包括实验目的、实验原理、实验步骤、所需试剂和仪器、结果分析等内容。

答案及解析

一、选择题答案及解析

1.D.以上都是

解析：引物退火温度取决于引物长度、GC含量和Tm值，这些因素共同影响引物的稳定性。

2.D.以上都是

解析：DNA凝胶电泳中，电场强度、凝胶浓度和DNA片段大小都会影响DNA片段的迁移速度。

3.A.分离蛋白质

解析：SDS电泳的主要作用是利用SDS使蛋白质变性并带有负电荷，根据蛋白质分子量大小进行分离。

4.D.以上都是

解析：载体质粒需要具备多克隆位点、抗生素抗性基因和复制起点等特性，以确保其在宿主细胞中的稳定表达和筛选。

5.A.将RNA逆转录为DNA

解析：RT-PCR实验中，逆转录酶将RNA逆转录为DNA，以便后续的PCR扩增。

6.A.连接DNA片段

解析：连接酶在亚克隆实验中用于连接DNA片段，使其重组到载体质粒上。

7.D.以上都是

解析：CRISPR-Cas9技术中，Cas9蛋白识别靶向序列并切割DNA，随后通过细胞自身的修复机制进行基因编辑。

8.A.T7启动子

解析：原核表达系统中，T7启动子是常用的启动子，通常与T7RNA聚合酶结合进行高效转录。

9.D.以上都是

解析：细胞培养基通常需要添加胰岛素、胎牛血清和氨基酸等成分，以提供细胞生长所需的营养物质。

10.D.以上都是

解析：流式细胞术可以用于分析细胞数量、细胞周期和细胞表面标志物等多种细胞学指标。

二、填空题答案及解析

1.退火温度通常设定在____55℃____和____65