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γ-氨基丁酸对人细胞因子诱导的杀伤细胞作用机制的深度剖析

一、引言

1.1研究背景与意义

γ-氨基丁酸（γ-aminobutyricacid，GABA）是一种在哺乳动物中枢神经系统中广泛分布的非蛋白质氨基酸，也是重要的抑制性神经递质，化学式为C_4H_9NO_2，分子质量为103.1。它在常温常压下是白色结晶体粉末状固体，无旋光性，微臭且易潮解，熔点在195至204℃，高于熔点时会分解为水和吡咯烷酮，能与水混溶，微溶于乙醇、丙酮，不溶于苯、乙醚。作为神经递质，GABA通过与相应受体结合，调节神经元的兴奋性，在调节大脑活动、情绪、睡眠-觉醒周期等方面发挥着关键作用，比如它能降低大脑的兴奋性，对辅助入眠有一定效果，缺乏时容易使人产生焦虑、失眠等症状。除了神经系统，GABA在免疫系统中也发挥着重要作用，其受体和相关酶存在于免疫细胞，如T细胞、树突细胞等。

细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-InducedKillerCells，CIK）是一类新型的免疫活性细胞，其制备过程是从患者外周血中提取单个核细胞，随后在体外通过多种细胞因子（如IFN-γ、rIL-2、CD3McAb和IL-1α等）的共同诱导，使其分化为具有强大杀伤力的细胞。CIK细胞兼具T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤特点，增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广，对多重耐药肿瘤细胞同样敏感，对正常骨髓造血前体细胞细胞毒性小，还能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡，疾病的严重性和转移也不影响其抗瘤活性，在肿瘤过继免疫治疗中极具应用前景，目前已用于肾癌、恶性黑色素瘤、结肠癌、淋巴瘤等多种肿瘤的临床研究，并取得了一定治疗效果。

免疫治疗作为肿瘤治疗的重要手段之一，CIK细胞疗法在其中占据着重要地位。然而，CIK细胞在体内的活性和功能受到多种因素的调控，深入了解这些调控机制对于优化CIK细胞治疗效果至关重要。研究γ-氨基丁酸对CIK细胞的作用，有助于揭示GABA在免疫系统中的新功能，为进一步阐明免疫调节的分子机制提供理论依据。通过探究GABA对CIK细胞增殖、凋亡、T细胞亚群以及杀瘤活性等方面的影响，可以为免疫治疗提供新的靶点和策略，提高肿瘤等疾病的治疗效果，具有重要的临床应用价值。

1.2国内外研究现状

国外对γ-氨基丁酸和免疫细胞关系的研究开展较早。一些研究聚焦于GABA对T淋巴细胞的调节作用，发现GABA可通过T淋巴细胞上的GABAA受体介导，抑制T淋巴细胞活化，调节免疫反应。在CIK细胞相关研究中，有报道指出GABA能显著抑制CIK细胞的生长，且呈剂量依赖性，同时降低CIK细胞表面分子CD28、CD25的表达，减少CD8+T细胞的百分比，抑制CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，且GABA受体激动剂（如THIP）能增强GABA的这些作用，单用THIP对CIK细胞生长、细胞周期、凋亡以及杀伤活性等也有明显影响。

国内研究人员也在该领域进行了深入探索。有研究利用MTT比色法、流式细胞术等技术，详细分析了不同浓度GABA和THIP作用于人CIK细胞后，CIK细胞在增殖、凋亡、免疫表型等方面的变化，进一步验证和补充了国外的研究成果，证实了GABA对CIK细胞的免疫抑制作用。不过，目前国内外关于γ-氨基丁酸对CIK细胞作用机制的研究还不够深入和全面。虽然已知GABA主要通过T淋巴细胞上的GABAA受体介导对CIK细胞产生作用，但对于受体激活后下游具体的信号传导通路，以及这些通路如何相互作用来调控CIK细胞的功能，仍存在许多未知之处。在不同疾病模型或不同个体状态下，GABA对CIK细胞的作用是否存在差异，也有待进一步研究。

1.3研究目的与方法

本研究旨在深入探究γ-氨基丁酸对人细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的作用机制，具体包括明确γ-氨基丁酸对CIK细胞增殖、凋亡、T细胞亚群分布以及杀瘤活性的影响，解析γ-氨基丁酸影响CIK细胞功能的分子信号通路，为免疫治疗提供新的理论基础和潜在靶点。

为实现上述研究目的，将采用以下研究方法：

细胞培养：从人外周血中分离单个核细胞，在体外利用含多种细胞因子（IFN-γ、rIL-2、CD3McAb和IL-1α等）的培养基诱导培养CIK细胞，为后续实验提供细胞来源。通过调整培养基成分、培养条件等，确保CIK细胞的正常生长和活性维持，严格按照细胞培养操作规程进行，避免污染，定期观察细胞形态和生长状态。

MTT法：利用MTT比色法检测γ-氨基丁酸作用前后CIK