2026届高三生物二轮复习课件：基因表达载体的构建及基因工程的技术应用.pptVIP

1234567(1)研究者首先构建质粒①(图a)用于在细胞内表达C-末端带SsrA短肽的mKate2,将质粒导入感受态细胞后,在添加抗生素的选择培养基上培养。根据培养基上菌落的生长状况,结合PCR及检测,筛选获得重组菌株W1。?图a荧光(或mKate2蛋白)1234567(2)将W1在适宜条件下进行摇瓶培养,定时取样检测培养液中细胞密度,方法有(答一种)。接种前需检测液体培养基的荧光强度,其作用是_______________________________________________________。培养结果(图b)表明,进入生长稳定期后荧光强度快速下降,原因是_______________________________________________________________________________________________________________________。图b显微镜直接计数法排除培养液本身的荧光强度对实验结果的干扰,保证实验结果的准确性PGro在生长稳定期停止基因转录,且C-末端带有SsrA短肽的mKate2被大肠杆菌内源蛋白酶系统特异性识别并降解1234567(3)研究者选用启动子PX、X基因(编码阻遏蛋白X,阻遏PX开启转录),重新构建质粒②(图a),导入野生型大肠杆菌中获得重组菌株W2。在适宜条件下摇瓶培养,W2的生长趋势不变,培养期间荧光强度的变化趋势为。?快速生长期荧光强度弱,生长稳定期荧光强度迅速上升1234567(4)莽草酸是一种重要工业化学品,其胞内合成代谢途径见图c。由于野生型大肠杆菌胞内酶A活性弱,且莽草酸会被快速转化为细胞生长必需物,因此细胞中无法大量积累莽草酸。为了保证细胞正常生长,并在生长稳定期实现莽草酸的大量积累,利用上述两种质粒的调控功能,结合野生型菌株遗传物质的改造,提出重组生产菌株构建思路:____________________________________________________________________________________________________________________________。图c用酶A基因替换质粒②中mKate2基因,用酶B基因替换质粒①中mKate2基因,构建酶B基因缺失的大肠杆菌突变菌株,并导入上述质粒1234567解析(1)在基因工程中,结合PCR技术扩增目的基因片段,可检测目的基因是否成功导入,依据荧光(mKate2蛋白)检测筛选出含有目的基因的重组菌株W1。(2)检测培养液中细胞密度时,由于大肠杆菌细胞是肉眼无法直接观察到的,因此常用的方法有显微镜直接计数法,显微镜直接计数法可通过细菌计数板在显微镜下直接数出细胞数量。接种前需要检测液体培养基的荧光强度,其目的是排除培养液本身的荧光强度对实验结果的干扰。根据图a中的注释可知,PGro在生长稳定期停止基因转录,且C-末端带有SsrA短肽的mKate2可被大肠杆菌内源蛋白酶系统特异性识别并降解,由于红色荧光蛋白mKate2减少,因此进入生长稳定期后荧光强度快速下降。1234567(3)图a中的质粒②,由于启动子PGro在细胞快速生长期开启转录,会使X基因编码的阻遏蛋白X阻遏PX开启转录,致使mKate2荧光蛋白表达受阻,同时X上带有SsrA短肽,又会被大肠杆菌不断降解,因此快速生长期荧光强度弱;而到了生长稳定期PGro停止基因转录,阻遏蛋白X又被不断降解而含量下降,PX开始大量转录,荧光蛋白不断积累,荧光强度不断上升。(4)根据(2)(3)知,用酶A基因替换质粒②中mKate2基因,使其在生长稳定期能持续合成酶A,从而促进莽草酸的合成,用酶B基因替换质粒①中mKate2基因,构建酶B基因缺失的大肠杆菌突变菌株,并导入上述质粒,使其在生长稳定期时酶B合成大量减少,从而实现莽草酸的大量积累。因此,为保证细胞正常生长,并在生长稳定期实现莽草酸的大量积累,重组生产菌株构建思路见答案。12345676.(11分)(2025·河南卷)卡拉胶是一类源于海洋红藻的大分子多糖,可被某些细菌降解为具有多种应用前景的卡拉胶寡糖。某研究小组拟筛选具有高活性卡拉胶酶(CG)的菌种用于生产卡拉胶寡糖。回答下列问题。(1)选择海藻和海泥作为样本筛选卡拉胶降解菌的原因是