2026届高三生物二轮复习课件：生物技术与工程-素养整合 诠释应用.pptxVIP

;;【例1】(2025·山东济宁模拟)融合PCR技术采用具有互补末端的引物,形成具有重叠链的PCR产物,通过PCR产物重叠链的延伸,从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示,据图分析,下列说法错误的是();解析题述过程中使用的引物P2和P3的碱基不需要完全互补配对,只需要部分碱基互补配对即可,A项错误。引物与DNA模板链结合后,能够从其3端开始连接脱氧核苷酸,开始子链的合成,B项正确。结合图示可知,融合PCR的第一步两条链重叠部位互补配对,可互为另一条链的引物,C项正确。若融合PCR的第二步获得了128个融合基因,引物数目和新合成的子链数目相同,即该过程消耗了128×2-2=254(个)引物,D项正确。;【例2】重叠延伸PCR技术是一项重要的基因定点突变技术,其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物(如图中的引物2和3,突起处代表与模板链不能互补的突变位点),分别进行PCR,获得有重叠链的两种DNA片段,再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得想要的目的基因。;(1)若拟突变位点的碱基对为A—T,则需要让其突变为才能达到目的。引物2的突变位点(突起处)应设计为(假设引物为单链DNA)。?

(2)在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的过程中,引物1、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次复制,共产生____种DNA分子。该阶段必须将引物1、2和引物3、4置于不同反应系统中,这是因为

。?

(3)利用重叠延伸PCR技术还可以将两个不同来源的DNA片段拼接起来。有人想利用该技术把基因M和N拼接在一起,设计基因M的引物M1、M2,基因N的引物N1、N2。在设计这4种引物时,特别要注意的问题是

????。?;【归纳拓展】

(1)基因定点突变,该技术要使用四种引物。考查内容可涉及与突变位点配对的引物设计情况、两个阶段引物的选择、扩增体系及产物等。解答此技术相关问题时可结合题图依据以下原则:引物2和3的突起处代表与模板链不能互补的突变位点,而这两条引物有部分碱基(包括突变位点)是可以互补的。因此,分别利用引物1??2、引物3和4进行PCR后,得到的DNA片段可以通过引物2和3互补的碱基杂交在一起,再在DNA聚合酶的作用下延伸,就能成为一条完整的DNA片段。最后,用引物1和4进行扩增得到含有突变位点的DNA片段。通过测序可以检验定点突变是否成功。;(2)构建融合基因,重叠延伸PCR还可以用于两个或两个以上异源基因DNA片段的拼接。引物上含有末端互补序列,通过PCR产生的两个DNA片段可通过引物延伸进行剪接和扩增,从而获得重组体,与定点突变不同的是待融合基因的PCR产物来自两个不同的基因,通过引物在两种PCR产物中产生互相重叠的链而获得融合基因。;二、反向PCR技术

反向PCR技术是用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段,对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。;【例3】(2025·安徽芜湖二模)反向PCR是一种通过已知序列设计引物对未知序列进行扩增的技术,其过程如下图所示。下列叙述错误的是();解析DNA子链合成的方向为5端到3端,因此要通过已知序列设计引物对未知序列进行扩增应选择引物1和引物4进行PCR扩增,A项正确。设计的引物不宜过短,否则扩增的特异性会下降,B项正确。PCR产物是包含所有已知序列和未知序列的链状DNA分子,扩增产物还需要经过限制酶切割后再用DNA连接酶连接才能形成环状,C项错误。整个过程需用到限制酶、DNA连接酶和耐高温的DNA聚合酶,D项正确。;三、不对称PCR

正常的PCR反应需要一对相对配置的引物同时扩增的两条模板链。如果只加入一条引物,那么将会只扩增一条模板链。像这种加入一条引物扩增的PCR反应叫作不对称PCR。;【例4】(2025·江苏扬州模拟)不对称PCR是一种常见的单链DNA探针制备方法,其原理是反应体系中加入一对数量不相等的引物,数量较少的为限制性引物,数量较多的为非限制性引物。假设体系中模板DNA数量为a,在PCR反应的早期10个循环中,扩增产物是双链DNA,限制性引物耗尽,非限制性引物继续引导合成大量目标DNA单链。下列说法正确的是();解析由于DNA聚合酶只能从3端延伸DNA链,引物Ⅱ和Ⅲ不能作为扩增探针序列的引物,据题干信息可知,数量较多的非限制性引物将引导合成大量目标DNA单链,若B链为所需的DNA分子探针,即目标DNA单链,则非限制性引物应选用引物Ⅰ,A项错误。两种引物与模板链结合即复性过程,该过程中