DB12_T 1284-2023 蜜蜂人工授精技术规程.docxVIP

ICS65.020.30CCSB47

12

天津市地方标准

DB12/T1284—2023

蜜蜂人工授精技术规程

Technicalregulationsforartificialinseminationofbees

2023-12-14发布2024-01-15实施

天津市市场监督管理委员会发布

I

DB12/T1284—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由天津市农业农村委员会提出并归口。

本文件起草单位：天津市正达蜂业有限公司、天津市农业发展服务中心、西青区农业农村发展服务中心。

本文件主要起草人：李泽青、许继明、于海霞、王永颖、陈荣荣、唐佩娟、刘群、耿建颖。

DB12/T1284—2023

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蜜蜂人工授精技术规程

1范围

本文件规定了蜜蜂人工授精的设备要求、环境要求以及操作要求等技术要求。

本文件适用于蜜蜂的人工繁殖。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB∕T41227-2021蜜蜂饲养管理技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

蜜蜂人工授精artificialinseminationofbees

通过器械装置把雄蜂精液注射入蜂王体内使其受精。

4设备要求

4.1仪器设备

蜂王人工授精仪、电子天平、显微镜、血球计数板、酸度计、离心机、紫外线灭菌灯、高压灭菌锅、医用方盘、手术剪刀、镊子、混精设备等。

4.2人工授精设备附件

4.2.1背钩、腹钩、探针

打开蜂王背腹板及阴道的附件，均是用（1mm～2mm）不锈钢丝手工制作而成。

4.2.2精液注射器

使用100μl微量进样器。微量进样器的管身是有机玻璃材料加工而成的，推杆、针座、针头均为不锈钢材质。

4.2.3授精针头

针头的外径不大于0.3mm，内径不小于0.17mm。

4.2.4二氧化碳麻醉系统

由CO2钢瓶、胶管、气体洗瓶、蜂王固定器构成。蜂王固定器由诱入管、通气活塞、麻醉管和固定底座构成。

2

DB12/T1284—2023

4.3人工授精试剂

4.3.1常用试剂

75%酒精、灭菌蒸馏水、煤酚皂溶液、氯化钾、2羟基-柠檬酸三钠、对氨基苯磺酰胺、碳酸氢钠等。

4.3.2精子稀释保护液配制

2-羟基柠檬酸三钠2.43g；碳酸氢钠：0.21g；氯化钾：0.04g；对氨基苯磺酰胺：0.30g；D-葡萄糖0.30g，蒸馏水定容至100ml。加热灭菌时，温度不超过90℃。

5环境要求

地面用5%的煤酚皂溶液喷洒消毒，台面用75%的酒精擦拭，空间用紫外线灯灭菌15min。金属及耐高温的器械和附件用消毒锅煮沸灭菌15～20min，不耐高温的器械用75%酒精擦拭或灌洗灭菌。塑料注射器及授精针头等用酒精消毒灭菌后，再用无菌蒸馏水冲洗4～5次。

6操作要求

6.1前期准备

6.1.1精子活力检查

选用优质雄蜂的精液，采集精液的雄蜂应符合GB∕T41227-2021的要求。取1ul新鲜雄蜂精液置于凹玻片上，使用精子稀释保护液进行20倍稀释，放上盖玻片，在显微镜下观察精子活力。运动的精子数

占精子总数的60%以上方可使用。

6.1.2处女蜂王的麻醉

选取优质处女蜂王，蜂王的选择应符合GB∕T41227-2021的要求。将蜂王装入麻醉室后，通过调节阀门以每秒钟流出约5个气泡为宜，等待足须不动时停止麻醉。

6.2操作要求

6.2.1拉开螫针腔

蜂王麻醉的同时，调节显微镜的位置及焦距，使处女蜂王的腹部清晰地呈现在视野中央。移动背腹钩操纵杆,使背腹钩在探针配合下,分别钩住背腹板顶端的中央位置,并向外侧拉动背腹板,使其间距为3～4mm,然后再移动背钩,使其“膨大”部分嵌入到螫针腔基部的三角缝内,再次移动背腹钩纵杆,把背腹板间距拉至5～6mm。

6.2.2进针注射

6.2.2.1螫针腔打开后,调整蜂王和针头的角度,使蜂王的纵轴线与注射器纵轴平行，其纵轴线与垂直线的夹角约30度左右，排除针头尖中的生理液和气泡后,使针尖接近阴道口,用探针压住瓣突,将针尖徐徐推入阴道,直至中部输卵管,取出探针,将精液慢慢注入。

6.2.2.2一次性授精通常注入