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小麦种子萌发前后淀粉酶活性的比较实验操作指南
一、技能要求
了解小麦萌发前后淀粉酶变化的原理,掌握比较酶活性的一种实验方法。
二、实验原理
淀粉酶是水解淀粉糖苷键的一类酶的总称,它广泛存在于禾谷类作物的种
子内。按照它水解淀粉的作用方式不同,可以分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。β
-淀粉酶主要存在小麦、大麦、黑麦等休眠种子中,而α-淀粉酶是在上述的
种子发芽过程中形成的,其活性随萌发时间的延长而增强。在禾谷类作物萌
发的种子中,这两类淀粉酶都存在,α-淀粉酶催化淀粉水解为糊精和麦芽糖,
所以又称糊精生成酶。β-淀粉酶直接把直链淀粉水解成麦芽糖,又名麦芽糖
酶。把支链淀粉水解成极限糊精和麦芽糖,并促使一部分糊精糖化,是两种
淀粉酶共同催化的结果。
三、药品与器材
1.仪器
试管和试管架,恒温水浴锅,托盘天平(100g),煤气灯(酒精灯),锥形
瓶(50ml),试管夹,量筒(10ml),玻璃漏斗,滤纸,移液管(2ml),移液
管架,玻璃棒,研钵,滴管。
2.药品
10%甘油,0.1%淀粉。
碘试剂(I2-KI溶液):将碘化钾20g及碘10g溶于100ml蒸馏水中,使
用前需稀释10倍。
3.材料
小麦种子干粉(过100目筛)和萌发2天、4天的小麦芽。
四、技能训练
1.酶液的制备
分别称取小麦种子干粉、萌发2天和萌发4天的小麦芽各2g,分别放入
研钵中研碎,各加入约10ml10%的甘油热溶液(50℃)。转移到锥形瓶中,放
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入37℃恒温水浴锅中提取1.5h,然后过滤,滤液为麦芽的酶提取液。
2.小麦萌发前后淀粉酶活性的比较
取10支试管,1~10编号。1、2号试管内各加入2ml种子酶提取液,3、4
号管内各加入2ml萌发两天麦芽的酶提取液,5、6号管内各加入2ml萌发四
天麦芽的酶提取液,7、8号管内各加入2ml萌发两天麦芽的酶提取液并在酒
精灯上煮沸2分钟,9、10号管内各加2ml蒸馏水。然后再向各管内各加入2ml
0.1%的淀粉溶液,摇匀后,同时放入37℃恒温水浴保温15min。同时取出10
支试管,冷却后各滴入2~3滴碘试剂,混匀,观察颜色变化,并解释实验结
果。
五、实验作业
按要求撰写实验报告,并分析实验结果。
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