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基于聚合物构建高效基因传输体系及其抗肿瘤机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

肿瘤，作为严重威胁人类健康的重大疾病，近年来其发病率和死亡率呈持续上升趋势，给社会和家庭带来了沉重的负担。世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球最新癌症负担数据显示，全球新发癌症病例1929万例，癌症死亡病例996万例。在中国，每年新发癌症病例约457万例，死亡病例约300万例。常见的肿瘤治疗手段如手术、化疗和放疗，虽然在一定程度上能够缓解病情，但都存在各自的局限性。手术治疗对于晚期肿瘤患者效果不佳，且存在复发风险；化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也会对正常细胞造成损害，引发严重的副作用；放疗则会对周围正常组织产生辐射损伤，限制了其应用范围。因此，开发更加安全、有效的肿瘤治疗方法迫在眉睫。

基因治疗作为一种新兴的治疗策略，为肿瘤治疗带来了新的希望。它通过将外源基因导入靶细胞，纠正或补偿异常基因的功能，从而达到治疗疾病的目的。基因治疗具有特异性高、能够从根本上治疗疾病等优势，在肿瘤治疗领域展现出巨大的潜力。例如，通过导入抑癌基因，可以抑制肿瘤细胞的生长和增殖；导入免疫调节基因，能够增强机体的免疫反应，攻击和消灭肿瘤细胞。然而，基因治疗的成功实施离不开高效的基因传输体系。基因本身是一种生物大分子，难以自行穿过细胞膜进入细胞内，且在体内容易被核酸酶降解。因此，需要借助合适的基因载体将基因安全、有效地递送至靶细胞。

聚合物基因传输体系作为一种非病毒基因载体，近年来受到了广泛的关注。与病毒载体相比，聚合物基因载体具有诸多优势。首先，聚合物基因载体的制备过程相对简单，成本较低，易于大规模生产。其次，聚合物基因载体的免疫原性较低，降低了机体对载体的免疫反应，提高了治疗的安全性。此外，聚合物基因载体的结构和性能可以通过化学修饰进行调控，使其能够更好地满足基因传递的需求。例如，通过引入靶向基团，可以实现基因载体对肿瘤细胞的特异性靶向递送；通过选择合适的聚合物材料，能够提高基因载体的稳定性和细胞摄取效率。因此，开发高效的聚合物基因传输体系对于推动基因治疗在肿瘤治疗中的应用具有重要的意义。

1.2研究目标与内容

本研究旨在构建一种高效的聚合物基因传输体系，并深入研究其在抗肿瘤治疗中的应用效果和作用机制。具体研究内容如下：

第一章：绪论：阐述肿瘤的现状及治疗难题，介绍基因治疗的原理、优势以及聚合物基因传输体系在基因治疗中的关键作用。对传统的聚合物基因载体进行综述，分析其优缺点，为后续研究提供理论基础。

第二章：利用金属配位作用提高低分子量聚乙烯亚胺基因转染效率：通过引入金属配位作用，对低分子量聚乙烯亚胺（PEI）进行改性，制备新型聚合物基因载体。研究金属配位作用对载体/DNA复合物的理化性质、细胞摄取、内涵体逃逸以及基因转染效率的影响，优化载体的性能。

第三章：利用多重相互作用构建高转染性能聚合物基因载体：基于多重相互作用原理，构建具有高转染性能的聚合物基因载体。通过实验和理论分析，研究载体与DNA之间的相互作用方式、载体的二级结构以及细胞内吞和内涵体逃逸机制，揭示载体高转染性能的内在原因。

第四章：构建肿瘤微环境响应的聚合物基因载体体内传输遮蔽体系：针对肿瘤微环境的特点，设计并构建肿瘤微环境响应的聚合物基因载体体内传输遮蔽体系。研究该体系在肿瘤微环境中的响应机制、体内分布和抗肿瘤效果，为提高基因治疗的靶向性和疗效提供新的策略。

1.3研究方法与技术路线

本研究综合运用实验研究和理论分析相结合的方法，深入探究高效聚合物基因传输体系的构建及其抗肿瘤性能。

实验研究：通过化学合成方法制备各种聚合物基因载体及相关材料，利用核磁共振（NMR）、质谱（MS）等手段对其结构进行表征。采用凝胶阻滞电泳实验、动态光散射（DLS）、Zeta电位分析仪等技术研究载体/DNA复合物的理化性质。运用细胞培养、体外转染、流式细胞术、激光共聚焦显微镜等方法研究载体的细胞摄取、内吞途径、内涵体逃逸以及基因转染效率和细胞毒性。通过建立肿瘤动物模型，开展体内基因转染、生物分布、药代动力学和抗肿瘤实验，评价载体的体内性能。

理论分析：借助等温滴定量热（ITC）实验、表面增强红外吸收光谱（SEIRAS）、圆二光谱（CD）等手段分析载体与DNA之间的相互作用能、结合模式以及载体的二级结构变化。运用分子动力学模拟等理论计算方法，从分子层面深入探讨载体与细胞膜、DNA的相互作用机制，以及载体在细胞内的转运过程，为实验结果提供理论支持。

技术路线方面，首先进行聚合物基因载体的设计与合成，通过化学修饰引入特定的功能基团，构建具有不同性能的聚合物基因载体。对制备的载体进行结构表征和理化性质分析，筛选出性能优良的载体进行后续研究。在细胞水平上，研究