2026届高考生物二轮复习：发酵工程和细胞工程热点拓展.pdfVIP

发酵工程和细胞工程

课前学习任务

热点拓展点

热点拓展一影印平板培养法

影印平板培养法是一种微生物培养技术其通过特定的操作方式实现在一系列培养皿的相

同位置上接种并培养出相同遗传型的菌落。这种方法在微生物学、基因工程等领域有着广泛

的应用。

把长有许多菌落的母种培养皿倒置于包有一层灭菌丝绒布的木质圆柱卬章上使其均匀地沾

满来自母培养皿平板上的菌落。然后可把这一“印章”上的菌落一一接种到不同的选择培养基

平板上。经培养后对各平板相同位置上的菌落进行对比就可选出适当的突变型菌株。因

此通过影印平板培养法就可以从非选择性条件下生长的细菌群体中分离到过去只有在选

择性条件下才能分离到的相应突变株。

以培养某种大肠杆菌如（转胰岛素基因大肠杆菌）为例选择具有标记基因青霉素抗性基因和

四环素抗性基因同时限制酹切点在青霉素抗性基因内部的质粒作载体与目的基因构建表

达载体。不考虑多个DNA片段的连接、目的基因的自我连接和目的基因的反向连接将得

到两种质粒：原有质粒重新连接而成的空质粒和重组质粒。将所得质粒与没有青霉素、四环

素抗性的大肠杆菌混合、转化将得到三种大肠杆菌即未转化的大肠杆菌、导入空质粒的

大肠杆菌和导入重组质粒的大肠杆菌。将所得大肠杆菌培养增加数量。然后接种到完全培

养基上得如图所示的6个菌落。然后用影印接种法将菌落分别接种到含有四环素和青霉

素的培养基上培养结果如图。

含有布家的培界羯

其中2号、5号菌落无法在两种培养基上生存说明所含大肠杆菌没有抗性基因即所含大

肠杆菌为未转化的大肠杆菌；1号、4号、6号菌落在两种培养基中均能生存说明其大肠

杆菌两种抗性都有即所含大肠杆菌为转化了空质粒的大肠杆菌；3号菌落能在含四环素的

培养基上生存说明其含有四环素的抗性不能在含青霉素的培养基上生存说明不含有青

霉素的抗性抗（性基因酶切插入目的基因后丧失其作用）综合分析其大肠杆菌含有重组质粒。

3号菌落所含大肠杆菌即是要选择培养的大肠杆菌。

热点拓展二抗原检测——双抗体夹心法

1.原理

双抗体夹心法是•种将两种特异性抗体结合在•起来检测目标抗原或抗体的方法。其基本原

理是先将一种特异性抗体捕〔获抗体）固定在固相载体如（微量滴定板、磁珠等）上，形成固相

抗体;然后加入待测样本，使样本的目标抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物；

再加入另一种特异性抗休检［测抗体或酶标抗体），该抗体与目标抗原的另一个表位结合，形

成双抗体夹心结构；最后通过加入底物产生颜色反应或触发信号反应如（光信号、电信号），

根据反应的程度进行目标抗原或抗体的定性或定量检测。

2.应用实例——早早孕试纸

人绒毛膜促性腺激素H（CG）是妇女妊娠期由胎盘产生的一种糖蛋白激素，HCG可在受孕后

的孕妇尿液检验到，而非妊娠孕妇尿液几乎不含该激素。用抗人绒毛膜促性腺激素单克

隆抗体做成的“早孕诊断试剂盒“灵敏度很高，在月经推迟7〜10天就可以做出诊断，比乳胶

法提前了10〜20天，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成的不利

影响。

显色剂标记的抗体I

■IIII|HCG

III

MAX标志线检测线对照线

将验孕试纸标有MAX标志线的一端插入待测尿液尿（液不能没过该线），片刻后取出平放，

若尿液含有HCG,会随尿液向右扩散,与包埋在标志线右侧区域的被显色剂标记的抗HCG