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《动物疫病检验技术》

血清学检验技术概述

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血清学检验技术概述

血清学反应是抗原和相应的抗体能发生特异性结合，在一定条件下可以出现肉眼可见的反应。由于抗体主要存在于动物血清中，通常以动物血清作为反应中的抗体因子，因此习惯上将体外的抗原抗体反应又称为血清学反应。在试验检验中，经常采用己知抗体来鉴定未知抗原，也常用己知的抗原来检验未知抗体(血清）。

免疫血清学技术自19世纪建立了最早和最简单的凝集试验开始，不断发展，尤其是近20余年来，各种新方法、新技术层出不穷，应用面也日益扩大，已深入到生物学科的各个研究领域。如：传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应、肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。此外，在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查，不仅推动了对各种免疫学现象的研究，而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。

由于各种检测方法中所用的抗原抗体性状不同，出现结果的现象以及检测的方法也不同。

所以我们通常将血清学试验分为：一级血清学试验：Ag-Ab结合后借助理化测试技术使不可见的反应，转化为可见反应或可检测的数据；对Ag-Ab要求不限。二级血清学试验：Ag-Ab结合后经过一定阶段出现凝集、沉淀、细胞溶解等现象；不能用于单价抗原单价抗体的检测。三级血清学试验：在活细胞或活体内进行的Ag-Ab反应；专门用于检测中和抗体和过敏性抗体。

既然血清学反应种类这么多，那有哪些特点呢？接下来我们看一下免疫血清学反应的一般特点

第一个特点特异性与交叉性

血清学反应具有高度特异性，如抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结合，而不能与口蹄疫病毒结合。这是血清学试验用于分析各种抗原和进行疾病诊断的基础。但若两种天然抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交叉反应。例如，鼠伤寒沙门菌的血清能凝集肠炎沙门菌，反之亦然。一般血缘越近，交叉反应的程度也越高。除相互交叉反应外．也有表现为单向交叉的．单向交叉在选择疫苗用菌(毒)株时有重要意义。交叉反应是区分血清型和亚型的重要依据。

第二个特点、亲和性与解离性

抗原与抗体就像酶与底物、激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合，既具有亲和性，也具有解离性。抗原决定簇与抗体可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间互补程度不同，抗原和抗体分子间的结合力强弱也不同。互补程度越高，则亲和力越强。

第三个特点：抗原与抗体最适比例与带现象

抗原和抗体的结合为弱能量的非共价键结合，其结合力决定于抗体的抗原结合位点与抗原表位之间形成的非共价键的数量、性质和距离，由此可分为高亲和力、中亲和力和低亲和力抗体。抗原与抗体的结合是分子表面的结合．这一过程受物理、化学、热力学的法则所制约，结合的温度应在0~40℃，pH值在4~9。如温度超过60℃或pH值降到3以下时，则抗原—抗体复合物又可重新解离。利用抗原抗体既能特异性地结合，又能在一定条件下重新分离这一特性，可进行免疫亲和层析，以制备免疫纯的抗原或抗体。

抗原与抗体在适宜的条件下就能发生结合反应。但对于常规的血清学反应，如凝集反应、沉淀反应、补体结合反应等，只有在抗原与抗体呈适当比例时．结合反应才出现凝集、沉淀等可见反应结果，在最适比例时，反应最明显。这种因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为带现象。凝集反应时，因抗原为大的颗粒性抗原，容易因抗体过多而出现前带现象，因而须将抗体做递进稀释，而固定抗原浓度；相反．沉淀反应的抗原为可溶性抗原，因抗原过量而出现后带现象。通过稀释抗原，以避免抗原过剩。通常以格子学说解释带现象，即大多数抗体为二价，而大多数抗原则为多价．只有两者比例适当时，才能形成彼此连接的大的复合物，而抗原过多或抗体过多时，形成的单个复合物不能连接成可见的复合物。

为了克服带现象，在进行血清学反应时，需将抗原和抗体做适当稀释，通常是固定一种成分而稀释另一种成分。为了选择抗原和抗体的最适用量，也可同时递进稀释抗原和抗体，用综合变量法进行方阵测定。

一些免疫检测技术(如标记抗体技术)，通常用于检测微量的抗原或抗体，反应中容易出现抗体或抗原过量，但因其检测的灵敏度高，只要有小的单一复合物存在即可被检测出来，因此不受带现象的限制。但在这些试验中，为了获得更好的特异性和敏感性，也需要用综合方阵变量法滴定抗原和抗体的最适用量。

免疫检测技术通常用于检测微量的抗原或抗体，反应中容易出现抗体或抗原过量，但因其检测的灵敏度高，只要有小的单一复合物存在即可被检测出来，因此不受带现象的限制。

血清学反应存在二阶段性，但其间无严格的界限。第一阶段为抗原与抗体的特异性结合阶段，反应快，几秒至几分钟