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《动物疫病检验技术》

细菌的药物敏感试验

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细菌的药物敏感试验

各种病原菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性也有差异，测定细菌对不同抗菌药物的敏感性，可筛选最有效的药物，或测定某种药物的抑菌(或杀菌)浓度，为临床用药控制细菌性疾病或为新的抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的是圆纸片扩散法。

一、细菌的耐药性

耐药性是指病原体与药物多次接触后，对药物的敏感性下降甚至消失，致使药物对该病原体的疗效降低或无效。请看这个微视频。

二、细菌的耐药机制

我们知道了什么是耐药性，那么，细菌是如何产生耐药性的呢？主要是通过以下三个途径：

1.细菌对抗菌药物的外排泵出作用。

2.抗菌药作用靶位置改变。

3.产生灭活抗菌药物的酶。

除以上三条主要途径之外，还有基因转移途径等等。

我们知道滥用药物不合理治疗是导致耐药菌产生的主要原因。因此，为了避免细菌产生耐药性，应合理选用有效的抗菌药，轮换用药。

三、药敏试验

细菌对抗菌药物的敏感试验，简称为药敏试验。药敏试验是指在体外测定药物抑制或杀死细菌的能力。测定细菌对抗菌药的敏感性可筛选最佳疗效药物，对于控制动物细菌性疾病的流行有重要的意义。

它的操作步骤是：第一步制备牛肉膏蛋白胨培养基；第二步病原菌的分离培养；第三步制备菌悬液；第四步制备药敏片；第五部药物敏感试验；第六步筛选敏感药物。下面我们分别看一下这六个步骤。

制备牛肉膏蛋白胨培养基。称量营养琼脂33克，加水1000毫升；或者按照这个配方分别称牛肉膏、蛋白胨等成分。在烧杯或白瓷缸中加入各成份，加热溶解。将配制的培养基分装于三角瓶，用封口膜包扎。最后将包装好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中进行灭菌。将灭菌好的培养基进行分装平板。

病原菌的分离培养。将无菌采取的病料在平板上进行划线接种，做好标记后，将平板倒置放在37℃培养箱中培养。从培养18至24小时的平板上挑取5-8个菌落于1毫升灭菌生理盐水中制成菌悬液，校正浓度至0.5麦氏标准。

制备药敏片，使用打孔机将定性滤纸打成直径6毫米的圆片，每100片放入一个小瓶中，高压灭菌后60℃烘干。将治疗浓度的待测抗菌药物溶液1毫升加入100片纸片中浸泡1-2个小时。烘干后，将药敏片装入无菌瓶中，低温保存备用。

用已灭菌的棉拭子蘸取已制备的菌悬液均匀涂布于平板的表面，划动三次，每次划动时，平皿转60度，最后绕平皿一周，在室温中干燥数分钟。用无菌镊子将药敏片贴于含菌平板上，每个平板贴4-6片纸片，纸片要贴均匀，各纸片中心相距不小于24毫米，纸片距平板边缘不小于15毫米，各纸片间距要相等。将平板倒置在37℃培养箱中，培养16-18小时后观察结果。

最后我们进行筛选敏感药物。根据药敏纸片周围抑菌圈直径的大小，判定细菌对药物的敏感程度。直径越大，说明细菌对这个药物越敏感。