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适配体功能化纳米金：革新氯霉素检测的前沿技术与应用

一、引言

1.1研究背景与意义

氯霉素（Chloramphenicol，CAP）作为一种广谱抗生素，曾在畜禽疾病防治中被广泛应用。但随着研究深入，其对人体健康的严重危害逐渐显现，如可导致再生障碍性贫血、灰婴综合征等，即使是微量残留也可能对人体造成潜在威胁。因此，准确检测食品中的氯霉素残留至关重要。传统的氯霉素检测方法如气相色谱-质谱联用（GC-MS）、液相色谱-质谱联用（LC-MS）等，虽然具有较高的准确性和灵敏度，但存在仪器昂贵、操作复杂、分析时间长等缺点，难以满足现场快速检测的需求。免疫分析法如酶联免疫吸附测定（ELISA）虽具有一定的便捷性，但抗体的制备过程复杂、稳定性差，且存在批间差异。

适配体功能化纳米金技术的出现为氯霉素检测带来了新的解决方案。适配体（Aptamer）是通过指数富集配体系统进化技术（SELEX）从随机寡核苷酸文库中筛选得到的单链DNA或RNA，能够特异性地结合靶分子，具有高亲和力、高特异性、易于合成和修饰等优点。纳米金（GoldNanoparticles，AuNPs）则具有独特的光学性质、良好的生物相容性和稳定性，其溶液颜色会随粒径和聚集状态的变化而改变，在生物传感领域展现出巨大的应用潜力。将适配体与纳米金相结合，构建适配体功能化纳米金传感器，能够充分发挥两者的优势，实现对氯霉素的快速、灵敏、特异性检测，有望解决传统检测方法的局限性，为食品安全检测领域提供一种新的技术手段，对于保障公众健康、维护食品安全具有重要的现实意义。

1.2氯霉素概述

氯霉素化学名称为D-苏式-（-）-N-[α-（羟基甲基）-β-羟基-对硝基苯乙基]-2，2-二氯乙酰胺，分子式为C_{11}H_{12}Cl_{2}N_{2}O_{5}，是一种白色至微黄色的针状或片状结晶，味苦，在甲醇、乙醇、丙酮或丙二醇中易溶，在水中微溶。它是第一个人工合成的广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用，尤其对伤寒杆菌、副伤寒杆菌、流感嗜血杆菌、百日咳杆菌等具有较强的抗菌活性。其作用机制主要是与细菌核糖体50S亚基上的肽酰转移酶结合，抑制肽链的延伸，从而阻止细菌蛋白质的合成。

在畜牧业中，氯霉素曾因其抗菌谱广、价格低廉而被广泛用于预防和治疗畜禽的呼吸道、消化道等感染性疾病。但由于其严重的毒副作用，如可引起不可逆的再生障碍性贫血，发病率虽低但死亡率高达50%-70%；还可能导致灰婴综合征，主要发生在早产儿和新生儿中，表现为循环衰竭、呼吸衰竭等，死亡率高。此外，长期使用氯霉素还会使细菌产生耐药性，破坏人体正常菌群平衡。鉴于这些危害，许多国家和地区已明确禁止氯霉素在食品动物中的使用。欧盟于1994年禁止氯霉素用于所有食品动物；美国食品药品监督管理局（FDA）也早在1984年就禁止氯霉素用于食用动物。我国同样严禁氯霉素在畜禽养殖中的使用，并制定了严格的残留限量标准，在动物性食品中不得检出氯霉素残留。

1.3适配体功能化纳米金技术简介

适配体的筛选主要通过SELEX技术实现。该技术的基本过程是首先构建一个含有10^{13}-10^{15}个随机寡核苷酸序列的文库，然后将文库与靶分子（如氯霉素）进行孵育，使能够与靶分子特异性结合的寡核苷酸序列从文库中分离出来。通过多次重复筛选、扩增、分离等步骤，逐渐富集高亲和力的适配体序列，最终得到能够特异性识别靶分子的适配体。适配体具有诸多特性，其与靶分子的结合具有高度特异性，亲和力可与抗体相媲美，解离常数（Kd）通常在纳摩尔（nM）至皮摩尔（pM）级别。而且适配体稳定性好，在不同的温度、pH值和离子强度条件下仍能保持其结构和功能的完整性，易于化学合成和修饰，可通过添加各种功能基团来改变其性质，以满足不同的应用需求。

纳米金是指金的微小颗粒，通常粒径在1-100nm之间。它具有独特的表面等离子体共振（SPR）特性，当光线照射到纳米金颗粒表面时，会引起其表面自由电子的集体振荡，从而吸收和散射特定波长的光，使纳米金溶液呈现出鲜艳的颜色。纳米金的颜色与其粒径和聚集状态密切相关，当纳米金颗粒分散良好时，溶液呈红色；而当颗粒发生聚集时，溶液颜色会逐渐变为蓝色或紫色。此外，纳米金还具有良好的生物相容性，能够与多种生物分子（如蛋白质、核酸等）通过物理吸附或化学偶联的方式结合，且不会显著影响生物分子的活性。

适配体功能化纳米金检测氯霉素的原理主要基于适配体与氯霉素的特异性结合以及纳米金的光学性质变化。当适配体修饰在纳米金表面时，在没有氯霉素存在的情况下，纳米金颗粒由于适配体的静电排斥作用而保持分散状态，溶液呈现红色。当加入氯