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中国汉族人群类风湿关节炎易感基因解析与Th17细胞关联研究

一、引言

1.1研究背景与意义

类风湿关节炎（RheumatoidArthritis，RA）是一种慢性、系统性自身免疫性疾病，以关节的炎症为主要特点，主要病理变化为慢性滑膜炎和血管炎。当炎症累及关节软骨和骨质时，会逐渐形成关节畸形和强直，最终导致关节功能丧失，严重影响患者的生活质量。RA在我国的患病率约为0.3%-0.5%，患者数量庞大，且发病后2年内大部分患者出现骨质破坏，给患者及其家庭带来沉重的负担，同时也对社会医疗资源造成较大压力。

RA的病因尚不明确，目前认为遗传、环境和免疫因素共同发挥作用。作为一种具有遗传倾向的多基因性疾病，RA的遗传率高达53%-65%，同卵双胞胎患病的相对危险度为15-20，遗传因素在整个遗传效应中作用约占60%。目前虽已发现一些RA的易感基因，如HLA-DR4、PADI4等，但仍有一半以上的易感基因和多态性位点未被发现。此外，RA的遗传特征具有明显的异质性，在主要的种族尤其是白种人和亚洲人之间，遗传学研究的结果常常不一致。之前高加索人的全基因组扫描发现了大量潜在的危险等位基因，然而这些结果是否适用于中国汉族人群，需要进一步验证。因此，研究中国汉族人群RA的易感基因，对于揭示RA的遗传机制，早期预测疾病风险，开展精准预防和治疗具有重要意义。

Th17细胞作为一种新型的辅助性T细胞亚群，其分化发育以及功能的发挥受到特定的细胞因子调控，能产生IL-17、IL-6和TNF-α等细胞因子。动物实验发现，Th17细胞在清除病原体感染和诱导自身免疫性炎症中发挥着重要作用。同时，有资料显示一些自身免疫病患者如炎性肠病、多发性硬化和银屑病等，存在着Th17细胞数量和功能异常。在RA患者中，Th17细胞及其相关细胞因子可能参与了关节炎症的发生和发展过程。深入研究RA患者外周血Th17细胞数量和功能的变化，有助于进一步阐明RA的免疫发病机制，为寻找新的治疗靶点提供理论依据。

1.2国内外研究现状

在国外，对RA易感基因的研究开展较早，通过全基因组关联研究（GWAS）等技术，在高加索人群中发现了多个与RA发病相关的基因位点，如PTPN22、STAT4等。这些研究为揭示RA的遗传机制奠定了基础。对于Th17细胞与RA的关系，国外研究表明，Th17细胞分泌的IL-17等细胞因子在RA关节炎症中发挥重要作用，可促进滑膜细胞增殖、炎症因子释放以及软骨和骨的破坏。

在国内，也有不少学者致力于RA的研究。在易感基因方面，对一些国外报道的易感基因在中国汉族人群中的多态性进行了验证，部分研究发现某些基因多态性在不同种族间存在差异，提示可能存在种族特异性的易感基因。关于Th17细胞，国内研究同样发现RA患者外周血Th17细胞数量增加，相关细胞因子水平升高，且与疾病活动性相关。然而，目前针对中国汉族人群RA易感基因和Th17细胞的系统性、大样本研究仍相对不足，对于两者之间的内在联系以及在疾病发生发展中的协同作用机制研究还不够深入。

1.3研究内容与方法

本研究主要包括以下内容：一是在中国汉族人群中对之前已报道的与高加索人相关的基因位点和可能存在种族差异的易感基因的多态性进行鉴定，包括PTPN22、STAT4、TNFAIP3、IL2RA、CTLA4等基因位点；二是观察RA患者外周血Th17细胞数量和功能的变化，以及抗TNF-α治疗对该细胞亚群的影响；三是探讨RA易感基因与Th17细胞之间的关联，进一步阐明RA的发病机制。

在研究方法上，采用病例-对照研究方法，以中国汉族RA患者群体及健康人群为研究对象。应用多重PCR引物延伸-实时荧光定量PCR（PCR-extension-real-timePCR）技术，对基因位点进行基因分型。运用酶联免疫吸附测定（ELISA）以及实时荧光定量PCR方法，分别从蛋白及mRNA水平对血清中IL-17、IL-6、IL-23、TGF-β等细胞因子进行检测。通过密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，用佛波酯和钙离子载体刺激后，利用流式细胞术检测Th17细胞比例。将分离出的初始CD4+T细胞加入不同的细胞因子微环境中体外培养，再用流式细胞仪检测Th17细胞的比例，观察体外不同微环境对Th17细胞分化的影响。通过这些研究方法，全面深入地探究中国汉族人类风湿关节炎易感基因及Th17细胞在RA发病中的作用。

二、类风湿关节炎概述

2.1定义与临床表现

类风湿关节炎是一种