疏勒河上游芨芨草根际与非根际微生物群落结构：特征剖析与影响因素探究.docxVIP

疏勒河上游芨芨草根际与非根际微生物群落结构：特征剖析与影响因素探究

一、引言

二、研究区域与方法

2.1研究区域概况

疏勒河上游位于青海省天峻县境内，地处青藏高原东北边缘，地理位置约为东经98°-99°，北纬37°-38°。该区域属于典型的高原大陆性气候，冬季漫长寒冷，夏季短促温凉，年均气温在-2℃至2℃之间，昼夜温差大，年降水量较少，约为200-300mm，且多集中在夏季，主要以降水和冰雪融水的形式补给河流，年蒸发量却高达1500-2000mm，气候干旱。

地形地貌以高山、峡谷和山间盆地为主，地势起伏较大，海拔高度多在3000-4500m之间。高山区域常年积雪覆盖，冰川发育，是疏勒河的重要水源地。山间盆地地势相对平坦，土壤类型主要为高山草甸土和高山草原土。高山草甸土分布在地势较为平坦、水分条件较好的区域，其腐殖质含量较高，可达5%-10%，土壤结构良好，呈微酸性反应，pH值一般在6.0-6.5之间，这为芨芨草等植物的生长提供了较为丰富的养分和适宜的土壤环境；高山草原土则多分布于山坡和地势稍高的地方，其腐殖质含量相对较低，约为2%-5%，土壤质地较粗，通气性良好，但保水保肥能力相对较弱，pH值在7.0-8.0之间，呈中性至微碱性。

疏勒河上游独特的气候、地形地貌和土壤条件，共同影响着芨芨草的生长。低温和干旱的气候条件使得芨芨草在长期的进化过程中，形成了耐旱、耐寒的特性，其根系发达，能够深入土壤中吸收水分和养分，以适应这种恶劣的环境。而土壤的养分含量、质地和酸碱性等因素，不仅直接影响芨芨草对养分的吸收和利用，还间接影响土壤微生物的活性和群落结构，进而对芨芨草的生长发育产生作用。例如，土壤中的微生物可以参与土壤养分的循环和转化，将有机物质分解为植物可吸收的无机养分，为芨芨草提供营养支持。同时，微生物还可以产生一些生长调节物质，促进芨芨草的生长和发育。

2.2样品采集

在疏勒河上游，依据地形地貌、植被分布以及土壤类型的差异来选取采样点。采用GPS定位技术，确保采样点的准确位置记录。为保证样品具有代表性，在不同的生境条件下，如高山草甸、山间盆地边缘等，共设置5个采样区域，每个区域内随机选取3个样点，样点之间的距离保持在50-100m，以避免空间自相关。

对于芨芨草根际土壤样品的采集，首先小心地挖掘芨芨草植株，尽量保持根系的完整性。将附着在根系表面0-2mm的土壤视为根际土壤，采用抖落法将其收集到无菌自封袋中。具体操作时，手持植株茎部，轻轻抖动根系，使根际土壤自然脱落到自封袋中，避免对根系造成损伤，确保根际微生物群落的原始状态不受破坏。

非根际土壤样品则采集距离芨芨草植株30-50cm处、深度为0-20cm的土壤。使用无菌土钻进行采样，将采集到的土壤混合均匀后，装入无菌自封袋。在整个采样过程中，为防止样品受到污染，采样人员需佩戴无菌手套，使用的采样工具均经过严格的消毒处理。每个样品采集后，立即标记采样地点、时间、样品类型等信息，并置于低温保温箱中，尽快带回实验室进行后续分析。

2.3分析方法

土壤理化性质的测定采用标准方法。土壤pH值使用玻璃电极法测定，将土样与去离子水按1:2.5的比例混合，搅拌均匀后，静置30min，用校正后的pH计测定上清液的pH值；有机质含量采用重铬酸钾氧化-外加热法，在加热条件下，用过量的重铬酸钾-硫酸溶液氧化土壤有机质中的碳，剩余的重铬酸钾用硫酸亚铁标准溶液滴定，根据消耗的重铬酸钾量计算有机碳量，再乘以常数1.724得到土壤有机质量；土壤全氮含量采用凯氏定氮法，将土壤样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使有机氮转化为铵盐，然后碱化蒸馏使氨逸出，用硼酸溶液吸收后，再用标准酸溶液滴定；速效磷含量利用碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定，用碳酸氢钠溶液浸提土壤中的速效磷，在一定酸度和还原剂作用下，浸提液中的磷酸根与钼锑抗显色剂反应，生成磷钼蓝，用分光光度计比色测定；速效钾含量采用醋酸铵浸提-火焰光度计法，以1mol/L醋酸铵溶液为浸提剂，将土壤中的速效钾浸提出来，然后用火焰光度计测定浸提液中的钾离子浓度。

微生物群落结构分析采用高通量测序技术。首先提取土壤样品中的总DNA，使用PowerSoilDNAIsolationKit试剂盒，按照其操作说明进行提取，确保提取的DNA质量和纯度满足后续实验要求。对细菌16SrRNA基因的V3-V4可变区进行PCR扩增，引物分别为338F（5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’）和806R（5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’）；对于真菌I