细胞培养必备知识.pptxVIP

1细胞培养cellculture是从体内取出组织单个细胞或单一细胞群模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并保持细胞特征，为细胞培养。细胞培养必备知识第1页

2各种液体要专员配制，并确保做到按规程行事；制备浓度准确、灭菌可靠。全部制备好溶液和试剂瓶上都要有标签，注上名称、浓度、消毒是否和制备日期。组织培养是一个程序比较复杂、需求条件多而严格试验性工作。因为工作步骤多，为确保操作上一致性，防止造成人为差异，应将全部操作程序制订统一规范，在一定时间内保持相对稳定和人人恪守。试验室管理制度细胞培养必备知识第2页

3培养用具要有固定存放地点（培养用具与非培养用具存放分开；已消毒与未消毒品严格分开存放），目标：防止各种杂质混入细胞生存环境、预防微生物感染和细胞“污染”。细胞培养必备知识第3页

4二、细胞生存条件及代谢细胞培养必备知识第4页

5无污染环境培养环境无毒和无菌是确保培养细胞生存首要条件。细胞被置于体外培养后，失去了对微生物和有毒物质防御能力，一旦被污染或本身代谢物积累等，可造成细胞死亡。（一）基本条件细胞培养必备知识第5页

6适宜温度人体细胞适宜温度为36.5℃+0.5℃，偏离这一温度范围，细胞正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温耐受力比对高温强。温度不低于0时，对细胞代谢虽有影响，但并无伤害作用；对培养液中加一定量保护剂（甘油或二甲基亚砜），封入安瓿中，冻存于液氮中，能长久储存，解冻后细胞复苏，仍能继续增殖生长，细胞生物性状不受任何影响，成为保留细胞最主要伎俩。温度对细胞生长影响细胞培养必备知识第6页

7气体和pH值O2参加三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种所需成份。多数细胞缺氧不能生存。开放培养时（碟皿或培养瓶松盖培养），普通要把细胞置于95%空气加5%CO2混合气体环境中。CO2既是细胞代谢产物，也是细胞所需成份，主要作用在于能维持培养基pH值。大多数细胞要求7.2-7.4。CO2+H2O←→H2CO3←→H++HCO3-细胞培养必备知识第7页

8营养物质糖、无机盐氨基酸、维生素促细胞生长因子牛血清是提供生长因子和细胞所需物质起源渗透压离子强度：260-320mOsm/Kg人工培养基细胞培养必备知识第8页

9二、试验设备无菌间、超净台、洗刷间、储存室、试验工作室孵箱、CO2孵箱、显微镜、纯水器、液氮罐、抽滤装置、离心机、干烤箱、高压灭菌器、加样器培养器皿、耗材（试管、吸管）细胞培养必备知识第9页

10三、在肿瘤学中应用细胞培养必备知识第10页

11肿瘤细胞生物特征学研究比较肿瘤细胞与正常细胞在体外培养条件下生长行为差异，研究肿瘤细胞生物学特征改变，对于建立诊疗标准有益。肿瘤细胞体外生长形态学研究肿瘤细胞生长特征细胞接触抑制试验细胞培养必备知识第11页

12肿瘤发病机制研究肿瘤产生诱发原因研究肿瘤细胞侵润机制和过程研究肿瘤与正常细胞共同培养法研究肿瘤药品筛选细胞培养必备知识第12页

13异种移植研究裸鼠发觉与应用建立了动物移植瘤模型抗肿瘤药品筛选研究肿瘤细胞调亡以及肿瘤细胞体外分化又成为新热点细胞培养必备知识第13页

14生物治疗活细胞---体细胞---体内活化细胞（LAK）---患者组织---悬液---培养---回输机体细胞培养必备知识第14页

15细胞培养：一、原代培养二、传代培养细胞培养必备知识第15页

16一原代培养细胞培养必备知识第16页

17原代培养（primaryculture）从体内取出组织或细胞第一次培养细胞培养必备知识第17页

18原理

??将动物机体各种组织从机体中取出，经各种酶（惯用胰蛋白酶）、螯合剂（惯用EDTA乙二胺四乙酸）或机械方法处理，分散成单细胞，置适当培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。细胞培养必备知识第18页

19仪器、材料及试剂

??仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）

??材料：动物组织块

??试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒

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20初代消化培养法

1.准备：取各种已消毒培养用具置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。3.处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素混合液中30~60分钟。

4.剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小块，方便于消化。加入比