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探秘新基因HA117：解锁肿瘤细胞株与裸鼠体内的耐药密码

一、引言

1.1研究背景与意义

肿瘤作为严重威胁人类健康的主要疾病之一，其发病率和死亡率一直居高不下。据调查预测，2020年全球新增癌症病例1930万例，癌症死亡人数达1000万例，且这一数字仍在不断攀升。在我国，恶性肿瘤占人口死亡原因的第二位，发病率以每年3%-5%的速度递增，预计2030年将有约500万人发生癌症，约350万人死于癌症。目前，肿瘤的治疗手段主要包括手术、化疗、放疗、靶向治疗和免疫治疗等。化疗在肿瘤综合治疗中占据重要地位，然而，肿瘤细胞对化疗药物产生的耐药性，成为了导致肿瘤化疗失败的最主要原因，严重制约了肿瘤治疗的效果和患者的生存预后。

肿瘤耐药可分为原发性耐药和获得性耐药。原发性耐药指肿瘤对药物自始至终均无反应，而获得性耐药则是指治疗初期患者对靶向治疗响应良好，但后期响应性降低。肿瘤细胞产生耐药的机制复杂多样，包括药物外排增加、药物靶点改变、细胞凋亡受阻、DNA损伤修复增强以及肿瘤微环境的改变等。例如，P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）等药物外排泵的高表达，可将细胞内的化疗药物泵出细胞外，降低细胞内药物浓度，从而使肿瘤细胞产生耐药；肿瘤细胞的基因突变或表观遗传改变，可导致药物靶点的结构和功能发生变化，使化疗药物无法有效作用于靶点；Bcl-2等抗凋亡蛋白的高表达，可抑制肿瘤细胞的凋亡，使其逃避化疗药物的杀伤作用。

全反式维甲酸（all-transretinoicacid，ATRA）作为一种有效的诱导分化剂，在急性早幼粒细胞白血病（acutepromyelocyticleukemia，APL）的治疗中取得了显著成效，开创了肿瘤诱导分化治疗的新领域。APL是急性髓细胞性白血病（acutemyeloidleukemia，AML）的一种特殊亚型，其发病的分子基础是15号染色体上的早幼粒细胞基因（PML）与17号染色体上的维甲酸受体基因（RARα）发生易位，形成PML-RARα融合基因。该融合基因会阻碍正常的RARα信号通路，抑制细胞的分化。而药理浓度（10-6-10-7M）的ATRA能够特异性地与PML-RARα融合蛋白结合，恢复RARα信号通路的正常功能，诱导APL细胞分化为成熟的粒细胞，从而实现临床缓解。然而，ATRA在使用过程中也面临着耐药问题，几乎所有患者在ATRA使用后1-3个月会形成耐药性，3个月到1年内复发。研究认为ATRA耐药的机制包括ATRA的代谢加速、细胞内细胞视黄酸结合蛋白（CRABPs）的表达增加、PML-RARα的结构性降解、PML-RARα上RARα的配体绑定区域的点突变、P-糖蛋白表达增加、组蛋白去乙酰化酶活性的转录水平抑制以及端粒酶的持续活性等。

近年来，随着分子生物学技术的不断发展，越来越多的耐药相关基因被发现和研究。HA117基因（HAGLR，HOXAantisensetranscript,non-codingRNA）作为一种新发现的与ATRA耐药相关的基因，逐渐受到关注。HA117基因是一种长链非编码RNA，在胚胎发育、细胞生长等生理过程中发挥着重要的调控作用。研究表明，在多种恶性肿瘤中，HA117基因表达异常，其高表达与肿瘤的生长、侵袭、转移及预后密切相关。在白血病细胞和乳腺癌细胞中，HA117基因具有多药耐药作用，其多药耐药指数与mdr1相近，而较mrp1为高。然而，目前关于HA117基因在肿瘤耐药中的具体作用机制尚未完全阐明。

深入研究HA117基因在肿瘤耐药中的作用及机制，对于揭示肿瘤耐药的分子机制、寻找新的治疗靶点、提高肿瘤治疗效果具有重要意义。通过对HA117基因的研究，有望为肿瘤的精准治疗提供新的策略和方法，改善肿瘤患者的预后，提高患者的生活质量。

1.2研究目的

本研究旨在深入探究新基因HA117在肿瘤细胞株及裸鼠体内的耐药功能，具体研究目的如下：

检测HA117基因在不同肿瘤细胞株中的表达水平，分析其表达与肿瘤耐药的相关性。通过定量PCR、Westernblot等技术，检测HA117基因在多种肿瘤细胞株（如白血病细胞株HL-60、乳腺癌细胞株MCF-7等）以及相应的耐药细胞株中的表达情况，明确HA117基因的表达差异与肿瘤耐药之间的关系。

构建HA117基因敲除或过表达的肿瘤细胞株，研究其对肿瘤细胞耐药性的影响。利用CRISPR/Cas9技术构建HA117基因敲除的肿瘤细胞株，通过基因转染技术构建