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基于基因表达谱芯片技术解析骨肉瘤MG-63侧群细胞差异基因及其功能

一、引言

1.1研究背景

骨肉瘤是一种高度恶性的原发性骨肿瘤，好发于青少年和儿童，严重威胁着患者的生命健康。据统计，骨肉瘤在儿童肿瘤相关死亡原因中居第二位，其恶性程度高，具有早期转移的特性，尤其是肺转移出现的概率较高，导致患者的5年总体生存率不足30%。尽管目前骨肉瘤的治疗手段主要为手术与化疗为主的辅助治疗，但近40年来患者的预后并无明显改善，这给患者家庭和社会带来了沉重的负担。

当前，骨肉瘤的发病机制尚未完全阐明，研究认为肿瘤的发生与癌基因激活、抗癌基因失活及其它基因的表达失控有关，是多种相关基因多阶段多途径协同作用的结果。因此，从基因层面深入探究骨肉瘤的发病机制，寻找有效的治疗靶点和新的治疗策略，成为了骨肉瘤研究领域的关键任务。

基因表达谱芯片技术作为一种高通量的基因分析工具，具有高效、高信息量的突出优点。它可以同时检测大量基因的表达水平，全面分析细胞或组织中的基因表达模式，为肿瘤研究提供了丰富的信息。在肿瘤研究中，基因表达谱芯片技术已被广泛应用于肿瘤亚型的鉴定、早期诊断、预后评估以及治疗反应预测等方面。通过基因表达谱芯片技术，能够筛选出与肿瘤发生、发展及转移相关的基因群，为深入理解肿瘤的发病机制提供重要线索，也为肿瘤的精准治疗奠定了基础。

1.2研究目的与意义

本研究旨在运用基因表达谱芯片技术，筛选骨肉瘤MG-63侧群细胞的差异基因，并对候选基因的功能进行验证。通过这一研究，期望能够发现与骨肉瘤发生、发展及转移密切相关的关键基因，进一步揭示骨肉瘤的发病机制。这不仅有助于从分子层面深入理解骨肉瘤的生物学行为，还能为骨肉瘤的治疗提供新的思路和潜在的治疗靶点。

从临床应用角度来看，明确这些关键基因可以为骨肉瘤的早期诊断、预后评估以及个体化治疗提供科学依据。通过检测这些基因的表达水平，有望实现对骨肉瘤患者的精准分层，为不同患者制定更加个性化的治疗方案，提高治疗效果，改善患者的预后，从而减轻患者家庭和社会的负担。因此，本研究具有重要的理论意义和临床应用价值。

二、骨肉瘤MG-63细胞与基因表达谱芯片技术概述

2.1骨肉瘤MG-63细胞特性

MG-63细胞是一种人成骨肉瘤细胞系，源自14岁患有骨肉瘤的白人男性。在细胞形态上，MG-63细胞呈现出成纤维细胞样或上皮细胞样形态，细胞形态较为规则，具有典型的细胞结构，如清晰的细胞核和丰富的细胞质。其生长特性为贴壁生长，在合适的培养条件下，细胞会紧密附着在培养瓶底部，呈单层分布，并随着培养时间的增加不断增殖。在含10%胎牛血清的MEM培养基中，于37℃、5%CO?的培养箱环境下，MG-63细胞生长状态良好，细胞倍增时间约为2-3天。

MG-63细胞在骨肉瘤研究领域具有重要的应用价值。由于其来源明确且具有骨肉瘤细胞的典型特征，常被用于骨肉瘤发病机制的研究。通过对MG-63细胞的研究，可以深入探讨骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、转移等生物学行为的分子机制。在药物研发方面，MG-63细胞可作为体外模型，用于筛选和评估抗骨肉瘤药物的疗效和作用机制，为临床治疗提供理论依据和实验基础。它还可用于研究骨肉瘤细胞对放疗、化疗的敏感性，为优化临床治疗方案提供参考。

2.2基因表达谱芯片技术原理与流程

基因表达谱芯片技术的工作原理基于核酸分子杂交技术。其核心是将大量已知序列的DNA探针，按照特定的排列方式固定在固相载体（如玻璃片、硅片等）表面，形成一个微小的基因阵列。这些探针可以与来自样品的互补核酸序列进行特异性杂交。

当样品中的核酸分子（如mRNA反转录得到的cDNA）与芯片上的探针进行杂交时，如果样品中存在与探针序列互补的核酸片段，它们就会通过碱基互补配对原则结合在一起，形成稳定的双链结构。为了检测杂交信号，通常会在样品核酸分子上标记荧光分子或其他可检测的标记物。在杂交反应完成后，通过特定的检测设备（如激光共聚焦扫描仪）对芯片进行扫描，检测每个探针位点的荧光强度或其他标记信号的强度。荧光信号的强弱与样品中对应基因的表达水平密切相关，信号越强，表明该基因在样品中的表达量越高；反之，则表达量越低。

基因表达谱芯片技术的流程主要包括以下几个关键步骤：

芯片制备：目前常用的芯片制备方法主要有原位合成法和微矩阵点样法。原位合成法是在芯片载体表面通过光蚀刻、喷墨打印等技术直接合成寡核苷酸探针，这种方法可以实现高密度的探针阵列制备，但成本较高、技术难度大。微矩阵点样法则是先合成好探针，然后利用机器人将探针精确地滴加到芯片载体的特定位置上，该方法操作相对简单、成本较低，适用于多种类型探针的制备。

样品处理：首先从细胞或组织样本中提取总RNA，提取过程需使用如TRI