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基因工程简介

基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。这种技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。(分子水平）

（一）基因操作的工具

1.基因的剪刀──限制性内切酶（限制酶）

一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列(特异性），并在特定的切割点上将DNA分子切断。目前已发现的限制酶有200（数量）多种。

如大肠杆菌中的一种限制酶，识别GAATTC序列，并切割G-A序列

结果：产生黏性末端

２、基因的针线──DNA连接酶

连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。

连接部位：磷酸二酯键

3、基因的运输工具——运载体

作用：将外源基因导入受体细胞

种类：质粒（最常用的运载体，是染色体外能够自我复制的很

小的环状DNA。）

噬菌体

动植物病毒

①能够在宿主细胞中复制并稳定的保存。

②具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接。

③具有标记基因便于筛选。

（二）基因工程的基本步骤

第一步：提取目的基因

1、直接分离法：鸟枪法（散弹射击法）

2、人工合成法

逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。

化学合成：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。

将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。

优点:是操作简便，缺点:是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。

第二步：目的基因与运载体结合

第三步：将目的基因导入受体细胞

借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径，通过运载体把目的基因带入某生物体内，并使目的基因在受体细胞内能准确地转录和翻译。

为使重组的DNA分子更容易进入受体细胞，通常要用CaCl2对受体细菌进行处理，使受体细菌具有更大的通透性。

第四步：目的基因的检测与表达

大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。

1、检测；判断目的基因是否导入受体细胞

2、表达：有没有产生特定的性状

三、基因工程的成果和前景

１、基因工程与医药卫生

２、基因工程与农牧业、食品工业

农业：获得高产稳产高品质的农作物、抗逆行新品种。

畜牧业：高产仔率，高产奶量的品种。如：超级小鼠

食品业：将鸡蛋白基因移入酵母菌来生产卵清蛋白

3、基因工程与环境保护

（1）环境监测：基因工程做成的DNA探针能够十分灵敏地检测环境中的病毒、细菌等污染。

1t水中只有10个病毒也能被DNA探针检测出来

利用基因工程培育的“指示生物”能十分灵敏地反映环境污染的情况，却不易因环境污染而大量死亡，甚至还可以吸收和转化污染物。

（2）环境污染治理：

假单孢杆菌能分解石油的成分，把分解三种烃类的基因转移到能分解另一种烃类的假单孢杆菌内，创造出同时能分解四种烃类的超级细菌。提高分解石油的效率。

拓展：原核细胞的基因结构

RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并与DNA分子的一条链为模板合成RNA。转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。

编码区：能够转录为相应的信史RNA，进而指导蛋白质的合成，能够编码蛋白质的区段。

非编码区：有调控遗传信息表达的核苷酸序列。