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尿嘧啶DNA糖基化酶功能与应用研究.pdf

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尿嘧啶糖基化酶(UDG)

描述:

尿嘧啶糖基化酶催化尿嘧啶与糖之间的N‑糖苷键水解反应,在含有尿嘧啶的单链或双链

中留下一个无碱基位点。该酶对短寡核苷酸(6个碱基)或RNA底物没有可测活性。

应用

•聚合酶链式反应(PCR)中残留污染的控制(1)

•糖基化酶介导的单核苷酸多态性检测(GMPD)(2)

•定点诱变(3)

•作为蛋白质相互作用研究的探针(4)

•单核苷酸多态性分型

•PCR产物克隆(5)

•PCR产物和c单链突出端的生成

一种重组E.coli菌株,携带来自E.coliK‑12的尿嘧啶糖基化酶。

比活性:77,000U/mg

随酶:

10倍UDG反应缓冲液

37°C孵育

10倍UDG反应缓冲液:

200mMTris‑HCI10

mMDTT10mME

DTApH8.0@25°C

供应形式:

10mMTris‑

HCl50mM

NaCl1mM

DTT0.1mM

EDTA50%甘油

pH7.5@25°C

单位定义

1单位定义为在37°C、1倍UDG反应缓冲液中,30分钟内从双链、氚标记、含尿嘧啶催化释放

1.8nmol尿嘧啶所需的酶量。

UracilGlycosylase(UDG)

Description:

Uracil-GlycosylasecatalyzesthehydrolysisoftheN-glycosylicbondweentheuracilandsugar,

leavinganabasicsiteinuracil-containingsingleordouble-stranded.Theenzymeshowsno

measurableactivityonshortoligonucleotides(6bases),orRNAsubstrates.

Applications

•Controlofcarry-overcontaminationinPCR(1)

•Glycosylasemediatedsinglenucleotidepolymorphismdetection(GMPD)(2)

•Site-directedmutagenesis(3)

•Asaprobeforprotein-interactionstudies(4)

•SNPgenotyping

•CloningofPCRproducts(5)

•GenerationofsinglestrandoverhangsofPCRproductsandc

Source:

ArecombinantE.colistraincarryingtheUracilGlycosylasegenefromE.coliK-12.

SpecificActivity:77,000U/mg

dWith:

10XUDGReactionBuffer

Incubateat37°C

10XUDGReactionBuffer:

200mMTris-HCI

10mMDTT

10mMEDTA

pH8.0@25°C

dIn:

10mMTris-HCl

50mMNaCl

1mMDTT

0.1mMEDTA

50%glycerol

pH7.5@25°C

UnitDefinition

1unitisdefinedastheamountofenzymethat

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