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2025年河北pcr上岗证考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共50分）

1.PCR技术中，引物的作用是（）

A.提供模板

B.激活Taq酶

C.使DNA双链解开

D.引导DNA合成的起始

答案：D。引物是一小段单链DNA或RNA，它能与模板DNA特定区域互补结合，为DNA聚合酶提供起始合成的3-OH末端，引导DNA合成的起始。

2.以下哪种物质不是PCR反应体系的必需成分（）

A.dNTP

B.引物

C.模板DNA

D.核酸酶

答案：D。PCR反应体系的必需成分包括模板DNA、引物、dNTP（脱氧核苷三磷酸）、DNA聚合酶（如Taq酶）和缓冲液等。核酸酶会降解核酸，不是PCR反应所需的成分。

3.PCR反应中变性温度一般为（）

A.55℃

B.72℃

C.9495℃

D.4℃

答案：C。变性步骤是使双链DNA解旋为单链，通常在9495℃下进行，这个温度可以破坏DNA双链之间的氢键。

4.实时荧光定量PCR技术中，SYBRGreenⅠ的作用是（）

A.标记引物

B.标记探针

C.与双链DNA结合发光

D.与单链DNA结合发光

答案：C。SYBRGreenⅠ是一种荧光染料，它能与双链DNA结合，在结合双链DNA后荧光信号增强，通过检测荧光信号的强度来定量PCR产物。

5.在PCR实验中，防止污染的措施不包括（）

A.设立阴性对照

B.不同操作区域使用不同的移液器

C.实验人员不戴口罩和手套

D.对实验器材进行严格的消毒处理

答案：C。实验人员不戴口罩和手套会增加污染的风险，设立阴性对照可以监测是否存在污染，不同操作区域使用不同的移液器以及对实验器材进行严格的消毒处理都是防止污染的重要措施。

6.下列关于PCR引物设计的原则，错误的是（）

A.引物长度一般为1825bp

B.引物的GC含量一般为40%60%

C.引物3端可以有多个连续的G或C

D.引物应避免形成二级结构

答案：C。引物3端应避免有多个连续的G或C，因为这样可能导致非特异性扩增。引物长度一般为1825bp，GC含量一般为40%60%，且应避免形成二级结构。

7.逆转录PCR（RTPCR）的第一步是（）

A.以RNA为模板合成cDNA

B.以cDNA为模板进行PCR扩增

C.提取总RNA

D.设计引物

答案：A。RTPCR首先需要以RNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA，然后再以cDNA为模板进行PCR扩增。提取总RNA是实验的前期准备工作，设计引物贯穿于整个实验设计阶段。

8.多重PCR是指（）

A.同时扩增多个不同的靶序列

B.多次进行PCR反应

C.使用多种引物进行一次PCR反应

D.以上都不对

答案：A。多重PCR是在同一PCR反应体系中加入多对引物，同时扩增多个不同的靶序列。

9.PCR产物的检测方法不包括（）

A.琼脂糖凝胶电泳

B.聚丙烯酰胺凝胶电泳

C.质谱分析

D.酶联免疫吸附测定（ELISA）

答案：D。PCR产物的检测方法常见的有琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱分析等。ELISA主要用于检测抗原或抗体，不是直接检测PCR产物的方法。

10.在PCR反应中，Taq酶的最适反应温度是（）

A.55℃

B.72℃

C.94℃

D.4℃

答案：B。Taq酶是一种热稳定的DNA聚合酶，其最适反应温度为72℃，在这个温度下它具有较高的活性，能够有效地合成DNA。

11.以下关于PCR实验中模板DNA的说法，正确的是（）

A.模板DNA的浓度越高越好

B.模板DNA可以是基因组DNA、线粒体DNA等

C.模板DNA不需要纯化

D.模板DNA只能是双链DNA

答案：B。模板DNA可以是基因组DNA、线粒体DNA等多种形式。模板DNA浓度过高可能会导致非特异性扩增，模板DNA通常需要进行一定的纯化以去除杂质，模板DNA也可以是单链DNA（如RTPCR中的cDNA）。

12.荧光定量PCR中，Ct值是指（）

A.达到荧光阈值时的循环数

B.荧光信号的强度

C.扩增产物的浓度

D.反应的时间

答案：A。Ct值（Cyclethreshold）是指在荧光定量PCR中，荧光信号达到设定的荧光阈值时所对应的循环数。它与起始模板的拷贝数呈反比关系。

13.下列哪种酶可以用于