猪白介素15基因克隆及其与胸腺素α1融合表达的研究.docxVIP

猪白介素15基因克隆及其与胸腺素α1融合表达的研究

一、引言

1.1研究背景与意义

在动物医学领域，免疫调节对于维持动物健康和抵抗疾病至关重要。猪白介素15（Interleukin-15，IL-15）和胸腺素α1（Thymosinα1）作为两种重要的免疫调节因子，各自发挥着独特的作用。

IL-15是一种多效性细胞因子，最早于1994年在猿肾上皮细胞培养上清液中被发现。它由多种细胞产生，包括基质细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、上皮细胞等。IL-15的mRNA广泛存在于各种免疫或非免疫细胞和组织中，但其蛋白主要局限于单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞。IL-15属于4α螺旋束细胞因子家族，通过与IL-15Rα/IL-2Rβ/γc异三聚体受体结合发出信号。在免疫调节方面，IL-15能促进自然杀伤细胞（NK细胞）、NK-T、γδT和记忆性CD8+T细胞的增殖，尤其在维持CD8+T细胞存活、稳态增殖和更新中发挥着关键作用。此外，IL-15是生成NK细胞的造血因子，可代替骨髓环境促进NK细胞分化成熟，并调节NK细胞活化和维持NK细胞稳态。在猪的养殖中，猪瘟、猪繁殖与呼吸综合症等疾病严重影响着养猪业的发展。IL-15作为一种重要的免疫调节因子，可增强猪的免疫力，提高其对这些疾病的抵抗力。已有研究表明，将IL-15作为分子佐剂与猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）主要免疫原蛋白GP5基因联合免疫小鼠，可有效增强小鼠的抗体水平和T淋巴细胞亚群数量，提高对PRRSV的免疫效果。

胸腺素α1是一种由28个氨基酸组成的酸性多肽，最早由Goldstein等从牛胸腺素组分5中分离纯化得到。它广泛存在于从哺乳动物到昆虫、真菌、原生生物的组织细胞中，蛋白质结构高度保守。胸腺素α1主要由在胸腺上皮细胞核内进行DNA复制和转录的胸腺素原α经酶解产生。在免疫调节方面，胸腺素α1具有调节和增强动物机体细胞免疫功能的作用。它能连续诱导和促进T淋巴细胞分化发育的各个阶段，诱导和促进T细胞的分化、成熟；调节机体的免疫平衡，促进T淋巴细胞产生各种细胞因子，调节T淋巴细胞亚群比例，使CD4+/CD8+趋于正常；通过对T4辅助细胞的激活作用来增强淋巴细胞反应，增强成熟T细胞对抗原或其他刺激的反应，且无明显的种属特异性；还可影响NK前体细胞的趋化，提高自然杀伤细胞NK的活力；调节和增强巨噬细胞的吞噬功能；调节和增强红细胞介导的免疫功能；调节和增强血清中SOD活性；调节和增强红细胞生成素的生成，调节造血祖细胞，粒系造血祖细胞的分化、发育成熟等。在兽医临床中，胸腺素α1可用于治疗猪的病毒性疾病，如猪流感、猪伪狂犬病等，通过增强猪的免疫力，帮助其抵抗病毒感染。

将猪IL-15基因与胸腺素α1进行融合表达，有望整合二者的免疫调节优势，产生更强大的免疫增强效果。这种融合表达产物可能在以下方面具有潜在应用价值：一是作为新型疫苗佐剂，提高现有猪用疫苗的免疫效果，减少疫苗用量和免疫次数，降低养殖成本；二是用于治疗猪的免疫相关疾病，增强患病猪的免疫力，促进其康复；三是为深入研究免疫调节机制提供新的工具和思路，推动动物免疫学的发展。因此，开展猪IL-15基因克隆及与胸腺素α1融合表达的研究具有重要的理论意义和实际应用价值。

1.2国内外研究现状

在猪白介素15基因克隆及相关研究方面，1997年Ana等用人IL-15基因引物首次从猪的外周血单核细胞（PBMC）的巨噬细胞中扩增出猪IL-15基因，完整序列为489bp，编码162个氨基酸。此后，众多学者对猪IL-15基因进行了深入研究。国内方面，郑兰兰等参照GenBank发表的猪IL-15cDNA基因序列，设计引物，采集6月龄河南良杂猪的脾脏，获取淋巴细胞后，提取总RNA，通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增，成功获得了河南良杂猪IL-15基因全序列，为进一步研究猪IL-15功能性蛋白的表达、生物学活性及其作为分子佐剂在疫苗免疫中的应用奠定了基础。在应用研究上，夏芳等将克隆至pcDNA3.1载体的含pIL-15基因真核表达质粒大量提取，联合猪瘟疫苗免疫小猪，通过ELISA和猪脾脏淋巴细胞MTT试验测定pIL-15的免疫佐剂效果，结果表明pcDNA-IL-15质粒免疫后，能有效提高猪瘟抗体水平，联合免疫后猪淋巴细胞免疫水平能得到明显提高。任晓峰等通过分子克隆技术构建了表达猪白细胞介素15及猪繁殖呼吸综合症病毒GP5基因重组核酸疫苗，以小鼠