精品复习课件基因工程.pptxVIP

第33讲基因工程;一、基因工程的概念理解

1.供体:提供目的基因的个体。

2.操作环境:①????无菌????。

3.操作水平:②????DNA分子????水平。

4.原理:基因重组。

5.受体:表达目的基因的个体。;6.本质:基因在③????受体生物????体内表达。

7.优点:克服④????远缘杂交不亲和????的障碍,定向改造生物的遗传性状。;二、DNA重组技术的基本工具

1.限制性核酸内切酶(简称:限制酶)

(1)来源:主要是从⑤????原核????生物中分离纯化出来的。

(2)作用:识别双链DNA分子的某种特定⑥????核苷酸序列????并使每条链

中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。

(3)结果:产生⑦????黏性末端????或平末端。;2.DNA连接酶

3.载体

(1)种类:⑩????质粒????、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。

(2)质粒特点?

;三、基因工程的操作程序

目的基

因的获取?;

将目的基因

导入受体细胞方法?

?????

目的基因的

检测与鉴定;技术名称;五、蛋白质工程

1.崛起缘由:天然蛋白质不一定完全符合人类生产和生活的需要。

2.目标:根据人们对蛋白质功能的特定需求,对蛋白质的结构进行分子设计。

3.操作手段:基因修饰或基因合成。

4.设计流程:预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的?????氨基酸????序列→找到相对应的?????脱氧核苷酸????序列

(基因)。;1.重组Ti质粒的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与。(?)

2.E·coliDNA连接酶既能连接平末端,又能连接黏性末端。?(?)

3.载体的作用是携带目的基因导入受体细胞中,使之稳定存在并表达。

(√)

4.表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点。?(?)

5.胰岛素基因表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获

得。?(?)

;6.可利用DNA分子杂交技术鉴定目的基因是否已导入受体细胞。(√)

7.若要从植物甲中获得耐旱基因,可首先建立该植物的基因组文库,再从

中筛选出所需的耐旱基因。?(√)

8.为培育抗除草剂的作物新品种,导入抗除草剂基因时须以受精卵为受

体。?(?)

9.将大肠杆菌的质粒连接上???生长激素的基因后,大肠杆菌获得的能产生人生长激素的变异可以遗传。?(√);10.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子进行直接操作,定向改变

分子的结构。?(?)

11.基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质,而蛋白质工程则可对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质。?(√);突破1基因工程的操作工具;(1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类

①应选择切点位于目的基因两端的限制酶,如图甲可选择PstⅠ。

②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶,如图甲不能选择SmaⅠ。

③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制

酶切割目的基因和质粒,如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。

;(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类

①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致,以确保具有相同的黏性末端。

②质粒作为载体必须具备标记基因等,所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构,如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因;如果所选酶的切点不是一个,则切割重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制起点区,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。

;2.限制酶与DNA连接酶的关系

?

?易混辨析????(1)限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因

之外,这样才能保证标记基因的完整性,有利于目的基因的检测。

(2)为使目的基因与载体形成相同的末端连接,通常使用同一种限制酶

将二者切割,但如果不同的限制酶切割DNA分子所产生的末端也存在

互补关系时,则两末端也可连接。;(3)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序

列或识别序列已经被修饰。

(4)限制酶是一类酶,而不是一种酶。

(5)DNA连接酶起作用时,不需要模板。;考向1以基础判断的形式,考查对基本工具的理解

1.下列有关基因表达载体的叙述,不正确的是?(B)

A.具有复制原点,使目的基因能在受体细胞内扩增

B.具有启动子,使DNA聚合酶识别并开始转录

C.具有标记基因,有利于目的基因的检测

D.具有目的基因,以实现产生特定的基因产物;解析???基因表达载体具有复制原点、启动子、目的基因、终止子和标记基因,复制原点使目的基因能在受体细胞内扩增。启动子是RNA聚合酶识别并结合的位点