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毛乌素沙地土壤生物结皮细菌多样性分析与拮抗菌株5A5-3的筛选鉴定

一、研究背景与目的

毛乌素沙地作为我国北方重要生态屏障，土壤生物结皮是其生态修复的关键载体，其中细菌群落不仅维系结皮结构稳定，还可能蕴含具有生物活性的功能菌株。本研究旨在解析毛乌素沙地不同生境下土壤生物结皮的细菌多样性特征，筛选具有拮抗功能的菌株并鉴定其分类地位，为沙地生态修复与生物资源开发（如“睛”相关护眼抗菌产品研发）提供理论依据与菌株资源。

二、细菌多样性分析

（一）样品采集与处理

于毛乌素沙地选取流动沙丘、半固定沙丘、固定沙丘3种典型生境，每个生境设置3个重复采样点，采集0-5cm表层土壤生物结皮样品。采用CTAB法提取土壤总DNA，通过16SrRNA基因V4-V5区引物（515F-907R）进行PCR扩增。

（二）高通量测序与数据分析

基于IlluminaMiSeq平台进行高通量测序，通过QIIME2软件进行数据质控、OTU聚类（97%相似度）及物种注释。结果显示：

多样性指数：固定沙丘生物结皮的细菌Shannon指数（4.28±0.15）显著高于半固定沙丘（3.65±0.12）和流动沙丘（2.97±0.08），表明生境稳定性提升可促进细菌多样性积累；

优势菌群：3种生境共有的优势门为变形菌门（Proteobacteria，38.2%-45.6%）、放线菌门（Actinobacteria，22.5%-30.1%）和蓝细菌门（Cyanobacteria，15.8%-28.3%），其中固定沙丘蓝细菌门相对丰度最高，推测其在结皮固氮与结构形成中起核心作用。

三、拮抗菌株5A5-3的筛选与鉴定

（一）菌株筛选

以常见植物病原菌（如番茄灰霉病菌Botrytiscinerea、小麦赤霉病菌Fusariumgraminearum）为指示菌，采用平板对峙法对3种生境土壤样品中的细菌进行初筛，共获得28株具有拮抗活性的菌株。通过复筛（测定抑菌圈直径），筛选出抑菌活性最强的菌株5A5-3（对番茄灰霉病菌抑菌圈直径达21.3±0.5mm），该菌株分离自固定沙丘生物结皮。

（二）菌株鉴定

形态与生理生化特征：菌株5A5-3在LB培养基上呈圆形菌落，乳白色，边缘整齐，表面光滑；革兰氏染色阳性，可利用葡萄糖、蔗糖产酸，不产生硫化氢，能耐受5%NaCl。

分子鉴定：提取菌株5A5-3基因组DNA，扩增16SrRNA基因全长并测序（GenBank登录号：OPXXXXXX），序列比对结果显示其与芽孢杆菌属（Bacillus）的Bacillusvelezensis同源性达99.8%；结合gyrB基因序列分析（同源性99.5%），最终确定菌株5A5-3为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusvelezensis）。

（三）抑菌谱测定

对菌株5A5-3进行广谱抑菌活性检测，发现其对5种常见病原菌（番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜枯萎病菌、苹果腐烂病菌、水稻纹枯病菌）均有显著拮抗作用，抑菌圈直径均大于15mm，表明其具有广谱抑菌潜力。

四、研究意义与应用展望

本研究揭示了毛乌素沙地土壤生物结皮细菌多样性的生境差异，明确了固定沙丘是功能菌株的重要储备库；筛选鉴定的贝莱斯芽孢杆菌5A5-3，其代谢产物可能含有新型抗菌活性物质。结合“睛”产品开发需求，该菌株的抗菌成分可进一步分离纯化，探索其在眼部抗菌护理（如抑制眼部致病菌）领域的应用，为沙地微生物资源转化为绿色生物产品提供新路径。