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鲍曼不动杆菌DiversiLab系统分型方法：构建、评估与临床应用

一、引言

1.1研究背景

鲍曼不动杆菌（Acinetobacterbaumannii）作为一种非发酵革兰阴性杆菌，在自然界中广泛分布，常见于水、土壤以及医院环境等，也是人体皮肤、呼吸道、消化道和泌尿生殖道的正常菌群之一，但在特定条件下，它会转变为极具威胁的病原菌。尤其是在医院环境里，鲍曼不动杆菌常常引发医院感染和院内交叉感染，严重威胁患者的健康。

从感染类型来看，鲍曼不动杆菌可引发多种感染，如菌血症、肺炎、脑膜炎、泌尿道和生殖道感染等。在肺部感染方面，它可导致患者出现发热、咳嗽、胸痛、气急及血性痰等症状，肺部影像学检查可能呈现细湿啰音、肺炎实变影，偶见肺脓肿及渗出性胸膜炎表现。在伤口及皮肤感染中，手术切口、烧伤及创伤的伤口容易继发感染，多无发热，偶可表现为蜂窝织炎。泌尿生殖系统感染时，可引起肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎、阴道炎等，常与留置导尿、膀胱造瘘等诱因相关。菌血症是鲍曼不动杆菌感染中较为严重的类型，病死率达30％以上，患者会出现发热、全身中毒症状、皮肤瘀点或瘀斑以及肝脾肿大等，重者可发展为感染性休克。脑膜炎则多发于颅脑手术后，有发热、头痛、呕吐、颈强直等化脓性脑膜炎表现。

更为严峻的是，鲍曼不动杆菌的耐药问题日益突出。国内资料显示，它对第三代和第四代头孢菌素的耐药率已达63.0％-89.9％，对四种氨基糖苷类（阿米卡星、庆大酶素、奈替米星、妥布霉素）和环丙沙星的耐药率均达96.3％。尽管目前我国绝大多数菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦和多黏菌素B保持敏感，但在呼吸道感染的治疗中效果并不理想。其耐药性的不断增强，不仅增加了临床治疗的难度，延长了患者的住院时间，还大幅提高了治疗成本，给患者家庭和社会带来了沉重的经济负担。

准确的分型对于鲍曼不动杆菌感染的防控至关重要。通过分型，能够追溯感染源，明确传播途径，进而采取有效的防控措施，阻断传播链，降低感染发生率。在疫情监测中，分型结果可以帮助及时发现潜在的感染风险，为疫情预警提供依据。在流行病学调查方面，分型能够深入了解菌株的分布规律和传播特点，为制定针对性的防控策略提供科学支持。例如，通过分析不同地区、不同医院的菌株分型，可判断是否存在克隆传播、暴发流行等情况，从而指导医疗机构加强感染控制措施，如严格手卫生、加强医疗器械消毒、优化病房环境管理等。然而，传统的细菌分型方法存在诸多局限性，如生化分型特异性差、血清学分型血清型种类有限且存在交叉反应等，难以满足临床和流行病学研究对鲍曼不动杆菌准确分型的需求。因此，建立一种高效、准确的鲍曼不动杆菌分型方法迫在眉睫。

1.2研究目的

本研究旨在建立基于DiversiLab系统的鲍曼不动杆菌分型方法，该系统以rep-PCR为原理，具有操作简便、快速等潜在优势。通过对收集的鲍曼不动杆菌标本进行菌株的分离、纯化和鉴定，运用DiversiLab系统进行分型和分析，并优化分型结果，建立一套完整、可靠的分型方法。同时，对该方法进行全面的性能评价，包括考察其准确度、可重复性和鉴定速度等指标，以明确该方法在分型能力上的可靠性和稳定性。还将评估该方法在实际临床样本中的应用效果，与其它已有方法（如脉冲场凝胶电泳分型、多位点序列分型技术等）进行比较分析，从分辨力、一致性等多方面深入探讨其在实际应用中的优势与不足，为临床和流行病学研究提供更具价值的鲍曼不动杆菌分型工具，助力鲍曼不动杆菌感染的精准防控。

二、鲍曼不动杆菌概述

2.1生物学特性

鲍曼不动杆菌属于非发酵革兰阴性杆菌，隶属于不动杆菌属。其形态较为独特，大小约为（0.6-1.0）微米×（1.0-1.6）微米，多呈现球杆状，两端钝圆，在显微镜下观察，常以散在或成对的形式排列。鲍曼不动杆菌没有芽孢及鞭毛，不具备运动能力，这使得其在传播方式上主要依赖外界因素，如通过接触传播、空气传播等途径在医院环境中扩散。在生长特性方面，鲍曼不动杆菌是需氧菌，对营养的需求不高，在普通培养基上就能良好生长。在血平板上，经过24小时的培养，会形成灰白色、圆形、光滑、湿润且边缘整齐的菌落，直径通常在1-2毫米。在麦康凯平板上，菌落呈无色透明状，这一特征有助于在初步鉴定时与其他能发酵乳糖产酸的细菌进行区分。从生化特征来看，鲍曼不动杆菌氧化酶阴性，触酶阳性。它不发酵糖类，不能利用乳糖、葡萄糖等常见糖类产酸，这一特性与许多发酵型革兰阴性杆菌不同。在糖醇类发酵试验中，它对甘露醇、蔗糖等糖醇类也不发酵。它不还原硝酸盐，吲哚试验呈阴性。这些生化特征构成了鲍曼不动杆菌的生物学特性，为其鉴定和研究提供了基础依据。

2.2致病性与耐药性

鲍曼不动杆菌的致病机制较为复杂，