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水稻Os-miR396过表达转基因植株的创制与功能解析：生长发育与抗逆调控机制的探索

一、引言

1.1研究背景与意义

水稻作为全球重要的粮食作物之一，为超过半数的世界人口提供主食，其产量和品质的提升对于保障全球粮食安全具有举足轻重的作用。在水稻的生长发育进程中，会遭遇诸如干旱、盐碱、病虫害等多种生物与非生物胁迫，这些逆境因素严重制约着水稻的产量和质量。同时，随着人口的持续增长以及耕地面积的逐渐减少，如何提高水稻的产量和品质，已成为农业领域亟待解决的关键问题。

微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一类内生的、长度约为21-24个核苷酸的非编码小分子RNA，在植物的生长发育、新陈代谢、信号转导以及对逆境胁迫的响应等众多生物学过程中发挥着关键的调控作用。它们通过与靶mRNA的互补配对，介导靶mRNA的切割或者抑制其翻译过程，从而实现对基因表达的精细调控。

Os-miR396作为水稻中一类重要的miRNA，已被证实参与调控水稻生长发育、光合作用及抗逆应答等多个生物学过程。在生长发育方面，它对水稻的株高、叶片大小、根系分布以及穗部发育等形态建成过程有着重要影响。例如，研究发现，通过调控Os-miR396的表达水平，可以改变水稻的株型，影响其光合作用效率，进而对产量产生作用。在抗逆应答方面，Os-miR396能够响应多种逆境胁迫，如干旱、高盐、低温以及病虫害等。当水稻受到这些逆境胁迫时，Os-miR396的表达水平会发生变化，进而调控相关靶基因的表达，增强水稻对逆境的适应能力。

鉴于Os-miR396在水稻生长发育和抗逆等过程中的重要作用，深入研究其生物学功能，尤其是通过获得Os-miR396过表达转基因植株，探究其对水稻生长发育和抗逆性的影响，对于揭示水稻生长发育和抗逆的分子机制具有重要的理论意义。同时，也有望为水稻的遗传改良和分子育种提供新的基因资源和理论依据，从而为提高水稻的产量和品质，保障全球粮食安全做出贡献。

1.2研究目的

本研究旨在通过转基因技术，获得Os-miR396过表达的水稻转基因植株，并对其进行全面深入的功能分析。具体而言，主要包括以下几个方面：一是成功构建Os-miR396过表达载体，并将其导入水稻细胞，获得稳定遗传的过表达转基因植株；二是对转基因植株的生长发育表型进行详细观察和分析，探究Os-miR396过表达对水稻株高、叶片形态、分蘖数、穗部性状等生长发育指标的影响；三是研究转基因植株在不同逆境胁迫条件下的抗逆性能，包括干旱、高盐、低温等非生物胁迫以及病虫害等生物胁迫，明确Os-miR396在水稻抗逆过程中的作用机制；四是通过分子生物学技术，分析Os-miR396过表达对其靶基因及相关信号通路基因表达的影响，进一步揭示Os-miR396调控水稻生长发育和抗逆性的分子机制。通过以上研究，为水稻的遗传改良和分子育种提供理论支持和技术支撑，推动水稻产业的可持续发展。

1.3国内外研究现状

国内外学者对水稻Os-miR396的研究已取得了一系列成果。在生长发育调控方面，研究发现Os-miR396通过靶向调控生长调节因子（GRF）基因家族，影响水稻的细胞增殖和分化，进而调控株高、叶夹角、粒型等重要农艺性状。如中科院分子植物科学卓越创新中心苗雪霞研究组发现，通过超表达mimicrymiR396（MIM396）下调OsmiR396的表达，能明显增大水稻粒形，且OsmiR396的靶基因之一OsGRF8超表达后的表型最接近于MIM396的表型，表明OsGRF8可能是介导OsmiR396对水稻粒形进行调控的重要因子。四川农业大学李双成、李平团队证实了OsmiR396c-GLW2-OsGIF1分子模块调控水稻粒型和粒重，该模块的导入可使水稻的千粒重增加20%，其主要通过调控细胞的扩张和增殖，在水稻籽粒发育的早期将颖壳扩大，解决“库容”问题，从而提高水稻产量。

在抗逆方面，武汉大学生命科学学院李绍清教授团队发现miR396b/GRF6模块可显著提高水稻的耐盐性，在耐盐胁迫下，MIM396和OE-GRF6转基因系的存活率比野生型分别增加了48.0%和74.4%。进一步研究表明，负调控因子ZNF9与miR396b的启动子直接结合，促进miR396b的表达，抑制GRF6，从而降低水稻耐盐性和产量；当敲除ZNF9，则促进GRF6表达，GRF6激活下游靶基因MYB3R的表达从而提高水稻耐盐性。

然而，现有研究仍存在一定不足。一方面，虽然对Os-miR396的某些功能和作用机制有了初步认识，但在其调