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畜禽重大疫病胶体金免疫层析快速检测技术规范

范围

本文件规定了畜禽重大疫病胶体金免疫层析快速检测技术的技术要求、检测步骤、结果判定及质量控制等内容。

本文件适用于猪瘟、猪蓝耳病、禽流感、鸡传染性法氏囊病等畜禽重大疫病的快速筛查检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27405-2024实验室质量控制规范动物疫病诊断

GB/T35823-2024动物疫病检测试剂盒质量评价要求

SN/T5488-2024进出口动物疫病诊断技术规程胶体金免疫层析法

ISO17025:2023检测和校准实验室能力的通用要求

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

胶体金免疫层析技术（ColloidalGoldImmunochromatography）

以硝酸纤维素膜为固相载体，通过毛细作用使样本中的抗原或抗体与膜上包被的特异性抗体或抗原结合，再通过胶体金标记物显色，实现目标物质快速检测的技术。

检测线（TestLine,T线）

硝酸纤维素膜上包被的特异性抗原或抗体区域，用于捕获样本中的目标物质。

质控线（ControlLine,C线）

硝酸纤维素膜上包被的二抗或其他控制物质区域，用于验证检测过程的有效性。

假阳性率（FalsePositiveRate）

检测结果为阳性，但实际样本中不含目标物质的概率。

假阴性率（FalseNegativeRate）

检测结果为阴性，但实际样本中含有目标物质的概率。

基本要求

检测环境

检测环境对于畜禽重大疫病胶体金免疫层析快速检测结果的准确性和可靠性至关重要。检测应在符合GB19489要求的生物安全二级（BSL-2）实验室或同等条件下开展。生物安全二级实验室具备一系列严格的防护设施和规范的操作流程，能够有效控制生物危害。在这样的环境中进行检测，可最大程度避免不同样本之间、样本与外界环境之间的交叉污染。因为畜禽疫病样本可能携带各种病原体，一旦发生交叉污染，会导致检测结果出现偏差，无法真实反映样本情况，进而影响疫病的诊断和防控，所以严格的环境要求是保障检测质量的基础。

人员要求

检测人员的专业素养和操作技能直接影响检测结果的准确性。检测人员应具备兽医或生物学相关专业背景，这是因为畜禽疫病检测涉及到动物病理学、免疫学等多方面的专业知识，具备相关专业背景的人员能够更好地理解检测原理和流程。同时，检测人员必须接受过胶体金免疫层析技术操作培训。通过系统培训，他们能够熟练掌握检测卡的使用方法、样本处理技巧、结果判读标准等关键操作环节。只有经过专业培训的人员，才能严格按照规范进行检测，减少人为误差，确保检测结果的可靠性和一致性，为畜禽疫病的精准防控提供有力支持。

设备与材料

合适的设备与材料是顺利完成畜禽重大疫病胶体金免疫层析快速检测的保障。设备与材料主要包括胶体金免疫层析检测卡（含配套试剂），它是检测的核心工具，其质量和性能直接影响检测效果。移液器（10μL～1000μL）用于准确量取样本和试剂，保证各成分的比例准确，避免因量取不准确而影响检测结果。离心机（相对离心力≥1000×g）可对样本进行离心处理，去除杂质，使样本更纯净，提高检测的准确性。生物安全柜或超净工作台能为检测操作提供一个相对无菌的环境，防止外界微生物污染样本和试剂。计时器则用于精确控制检测时间，确保每个检测步骤在规定时间内完成，保证检测结果的稳定性和可重复性。

检测原理

胶体金免疫层析技术整体原理

胶体金免疫层析技术是一种基于抗原-抗体特异性结合反应的快速检测技术。它以硝酸纤维素膜作为固相载体，利用其良好的吸附性能和毛细作用。在检测过程中，样本在毛细作用下沿着硝酸纤维素膜向前移动。样本中的抗原或抗体在移动过程中，会与膜上预先包被的特异性抗体或抗原发生特异性结合。同时，胶体金颗粒作为标记物，与相应的抗体或抗原结合形成复合物。当这些复合物移动到检测线（T线）时，若样本中存在目标物质，就会与检测线上的包被物质进一步结合，使胶体金颗粒聚集，从而显示出肉眼可见的颜色变化，实现目标物质的快速检测。而质控线（C线）则通过与特定的二抗或其他控制物质结合，验证整个检测过程的有效性，确保检测结果的可靠。

抗原-抗体结合机制

抗原-抗体结合是胶体金免疫层析技术的核心基础。抗原是能够刺激机体产生免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合的物质。抗体则是机体免疫系统受抗原刺激后，由淋巴细胞分化成的浆细胞所产