农杆菌介导sbe Ⅱb基因RNA干涉片段对玉米自交系遗传转化及淀粉品质改良研究.docxVIP

农杆菌介导sbeⅡb基因RNA干涉片段对玉米自交系遗传转化及淀粉品质改良研究

一、引言

1.1研究背景与意义

玉米（ZeamaysL.）作为全球重要的粮食作物之一，在粮食安全、饲料生产及工业加工等领域都占据着举足轻重的地位。从粮食角度来看，它是众多人口的主食来源，为人类提供了丰富的碳水化合物、蛋白质、维生素和矿物质等营养成分。在饲料行业，玉米凭借其高能量和丰富的营养物质，成为了畜禽饲料的关键原料，对畜牧业的发展起着支撑性作用，其产量和品质直接影响着肉类、蛋类和奶制品等的供应。在工业领域，玉米更是应用广泛，可被加工成淀粉、糖浆、玉米油、酒精等多种产品。其中，玉米淀粉作为玉米深加工的重要产物，在食品、造纸、纺织、医药、化工等行业有着不可或缺的地位，如在食品行业用于制作各类淀粉制品、增稠剂等；在造纸工业中用于纸张施胶、增强纸张强度；在纺织业可作为上浆剂；在医药领域用于药物制剂的生产等。

随着人们生活水平的提高以及工业的快速发展，对玉米淀粉品质的要求也日益提升。不同的工业用途和消费需求，对玉米淀粉的结构、理化性质等提出了多样化的要求。例如，在食品加工中，某些特殊食品需要特定直链淀粉与支链淀粉比例的玉米淀粉，以满足其独特的口感和加工性能；在生物降解材料领域，高直链淀粉含量的玉米淀粉更具优势，因为直链淀粉可使塑料制品具有生物降解性，是解决“白色污染”问题的有效原料。然而，普通玉米淀粉的品质难以满足这些日益多样化的需求。因此，改良玉米淀粉品质已成为玉米研究领域的关键任务，对于推动玉米产业的升级、提高玉米附加值以及满足市场多样化需求具有重要意义。

本研究聚焦于农杆菌介导sbeⅡb基因RNA干涉片段转化玉米自交系，旨在通过基因工程技术改变玉米淀粉合成相关基因的表达，从而改良玉米淀粉品质。这不仅有助于深入了解玉米淀粉合成的分子机制，还为玉米分子育种提供了新的思路和方法，推动玉米育种从传统的常规育种向高效、精准的分子育种转变，对于培育出具有优良淀粉品质的玉米新品种，提升我国玉米产业的竞争力具有重要的理论和实践意义。

1.2国内外研究现状

在玉米再生体系方面，自从1975年Green和Phillips以A188的幼胚为材料诱导愈伤组织并首次获得玉米再生植株以来，相关研究取得了显著进展。目前，已能从多种外植体如幼胚、幼叶、花药等诱导出愈伤组织并再生植株。研究发现，基因型是影响玉米愈伤组织诱导和再生的关键因素之一，不同玉米自交系在愈伤组织诱导率、再生能力等方面存在显著差异。培养基的成分，包括植物生长调节剂（如2,4-D、6-BA、NAA等）、碳源、氮源、维生素等，对玉米再生体系的建立也至关重要。例如，合适浓度的2,4-D是诱导Ⅱ型愈伤组织的关键因素，Ms培养基中添加4mg?L?12,4-D、0.5mg?L?1BA、750mg?L?1L-脯氨酸和250mg?L?1水解酪蛋白时，Ⅱ型愈伤组织诱导率最高。此外，幼胚大小、培养条件（如光照、温度、湿度等）也会对玉米再生产生影响，一般认为幼胚大小在1.5-2mm时最适于诱导胚性愈伤。

在玉米遗传转化方法上，目前常用的有农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法等。农杆菌介导法因其具有操作简单、成本低、转化效率较高、整合位点较稳定且多为单拷贝插入等优点，成为了玉米遗传转化的主要方法之一。但该方法也存在一定局限性，如对基因型有较强的依赖性，某些玉米自交系难以被农杆菌转化。基因枪法虽然不受基因型限制，但转化成本高，且易造成基因多拷贝插入，导致转基因植株后代遗传稳定性差。花粉管通道法操作相对简便，但转化效率较低，重复性较差。

RNA干涉技术在玉米淀粉品质改良中的应用研究也取得了一定成果。淀粉分支酶（starchbranchingenzymes，SBE）是淀粉生物合成过程中的关键酶，它能切开α—1，4一糖苷键连接的寡糖片断，并通过α—1，6—糖苷键连接于受体链上形成分支结构。玉米淀粉分支酶有3种同工酶，SBEI、SBEIIa和SBEIIb，其中SBEI、SBEIIb主要在胚乳中存在。利用RNAi技术沉默淀粉分支酶基因的表达，可改变玉米淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例，从而改良淀粉品质。例如，有研究通过向玉米中导入sbeⅡb基因的RNAi载体，成功提高了玉米中直链淀粉的含量。然而，目前RNAi技术在玉米淀粉品质改良中的应用仍存在一些问题，如RNAi载体的构建效率有待提高、转化后基因沉默的稳定性和持久性需要进一步研究、对转化后玉米植株的生长发育和其他农艺性状的影响还需深入评估等。

1.3研究目标与内容

本研究的目标是建立高效的农杆菌介导sbeⅡb基因RNA干