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笃斯越橘VcWRKY24与VcWRKY33基因的克隆、特征解析及功能洞察

一、引言

1.1研究背景与意义

笃斯越橘（VacciniumuliginosumL.），作为杜鹃花科越橘属的多年生落叶灌木，在全球生态系统与经济体系中占据着独特而重要的地位。它广泛分布于亚洲、欧洲、北美洲等高纬度或高海拔地区，在中国主要集中于辽宁、内蒙古、黑龙江、吉林等地。笃斯越橘不仅是生态系统的重要组成部分，对于维持生物多样性、保持水土、调节气候等生态功能意义重大；而且其果实富含多种营养成分，如维生素C、E、P、B6、A，多种氨基酸、蛋白质以及具有抗氧化作用的SOD等，具有极高的营养价值与保健功能，在食品、医药、化妆品等行业展现出广阔的应用前景，为相关产业的发展提供了丰富的原料资源。

然而，笃斯越橘的生长发育面临着诸多逆境胁迫的挑战。温度的剧烈波动，如极端低温或高温，会严重影响其生长周期、花芽分化、坐果率以及果实品质；水分的失衡，无论是干旱导致的水分亏缺，还是洪涝造成的积水，都可能阻碍其正常的生理代谢过程，引发根系缺氧、营养吸收受阻等问题；土壤中过高的盐分含量，会破坏细胞的渗透平衡，干扰离子稳态，抑制光合作用和呼吸作用，进而限制植株的生长和发育；此外，重金属污染也会对笃斯越橘产生毒害作用，影响其细胞结构和酶活性，降低其抗逆能力。这些逆境胁迫严重制约了笃斯越橘的种植范围、产量和品质，给相关产业的可持续发展带来了严峻的考验。

植物在长期的进化历程中，逐渐形成了一套复杂而精细的抗逆调控机制，以应对各种逆境胁迫。其中，转录因子在植物抗逆调控网络中发挥着核心作用。WRKY转录因子家族，作为植物中最大的转录因子家族之一，其成员众多，结构多样，功能复杂。WRKY转录因子的结构特征主要体现在其保守的WRKY结构域，该结构域由大约60个氨基酸残基组成，其中包含一个高度保守的WRKYGQK序列和一个锌指结构。根据WRKY结构域的数量和锌指结构的类型，WRKY转录因子家族可分为三个主要的亚家族：GroupⅠ、GroupⅡ和GroupⅢ。不同亚家族的WRKY转录因子在结构和功能上既存在差异，又相互协作，通过与下游靶基因启动子区域的W-box顺式作用元件（TTGACC/T）特异性结合，在转录水平上激活或抑制靶基因的表达，从而广泛参与植物的生长发育、代谢调节以及对多种逆境胁迫的响应过程。

大量研究表明，WRKY转录因子在植物应对生物胁迫（如病原菌侵染）和非生物胁迫（如干旱、盐渍、低温、高温等）中发挥着至关重要的作用。在生物胁迫响应中，WRKY转录因子能够激活植物抗毒素和细菌水解酶类等基因的表达，增强植物的抗病能力；同时，还参与调控植物中抗病信号分子如水杨酸、茉莉酸的合成，介导植物的系统获得性抗性。在非生物胁迫响应方面，WRKY转录因子可以调节植物的渗透调节物质合成、抗氧化酶活性、离子转运蛋白表达等，提高植物对干旱、盐渍、低温、高温等非生物胁迫的耐受性。例如，在干旱胁迫下，拟南芥中的AtWRKY25和AtWRKY33基因的表达显著上调，过表达这两个基因能够增强拟南芥对干旱胁迫的耐受性；在盐胁迫下，水稻中的OsWRKY45基因被诱导表达，其过表达植株表现出对盐胁迫的抗性增强；在低温胁迫下，杨树中的PtWRKY12基因的表达受低温诱导，沉默该基因会降低杨树对低温胁迫的耐受性。

尽管目前关于WRKY转录因子在模式植物中的研究已取得了丰硕的成果，但在笃斯越橘这一重要的经济植物中，相关研究仍处于起步阶段。深入开展笃斯越橘WRKY转录因子的研究，不仅有助于揭示笃斯越橘应对逆境胁迫的分子调控机制，为其遗传改良和抗逆品种培育提供坚实的理论基础；而且对于丰富植物WRKY转录因子家族的研究内容，拓展其在非模式植物中的应用具有重要的科学意义。从应用角度来看，通过基因工程手段调控笃斯越橘WRKY转录因子的表达，有望培育出具有更强抗逆性的笃斯越橘新品种，提高其在逆境环境中的产量和品质，促进笃斯越橘产业的可持续发展，满足人们对高品质笃斯越橘产品的需求，同时也为其他植物的抗逆研究和遗传改良提供宝贵的借鉴和参考。

1.2国内外研究现状

1.2.1越橘逆胁迫的研究进展

越橘作为一种重要的经济作物，其在生长过程中面临着多种逆胁迫的挑战，国内外学者对此展开了广泛而深入的研究。在温度胁迫方面，研究发现不同品种的越橘对低温和高温的耐受性存在显著差异。例如，“北村”和“美登”表现出较好的抗寒能力，能够在低温环境下保持相对稳定的生长和生理代谢；而“夏普蓝”则具有较好的耐热能力，在高温条件下仍能维持一定的光合作用和生长发育。低温胁迫会影响越橘的细胞膜透性、抗氧化酶活性以及渗透调节物质的积累，从而对其生长和产量产生不利影响。