斑马鱼吲哚胺2-3-双加氧酶IDO酶联免疫检测试剂盒使用说明书AE92715Fi.docxVIP

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斑马鱼吗|喙胺2,3-双加氧酶(IDO)酶联免疫

检测试剂盒使用说明书AE92715Fi使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,

来检测斑马鱼口引珠胺2,3-双加氧酶(ID0),只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

用途：用于斑马鱼血清、血浆及相关液体样本中呼1口朵胺2,3-双加氧酶(ID0)测定。

工作原理

本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中斑马鱼口那朵胺2,3-双加氧酶(ID0)水平。向预先包被了斑马鱼口弓I噪胺2,3-双加氧酸(ID0)单克隆抗体的前标孔中加入斑马鱼吗|口朵胺2,3-双加氧酶(口0),温育；温育后，加入生物素标记的抗ID0抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中斑马鱼口引珠胺2,3-双加氧酶(ID0)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份

封板膜

2片(48)

2片(96)

密封袋

1个

1个

酶标包被板

1X48

1X96

2-8。。保存

标准品320ng/L

0.5mlXI瓶

0.5mlX1瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

3mlXI瓶

6mlX1瓶

2-8℃保存

链霉亲和素-HRP

3mlXl瓶

6mix1瓶

2-8℃保存

生物素标记的抗TD。抗

体

0.5mlXI瓶

1mlXl瓶

2-8C保存

显色剂A液

3mlXl瓶

6mlX1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3mlXl瓶

6mix1瓶

2-8℃保存

终止液

3mlXI瓶

6mlX1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20mlX20倍)XI瓶

(20mlX30倍)XI瓶

2-8℃保存

需要而未提供的试剂和器材

.37℃恒温箱。

.标准规格酶标仪。

.精密移液器及一次性吸头

.蒸储水，

.一次性试管

.吸水纸

考前须知.从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以防止试验误差

.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

.为防止交叉污染，要防止重复使用手中的吸头和封板膜。

.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

.底物B对光敏感，防止长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡厂2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。假设不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应防止反复冻融。

操作程序

.标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照以下图表在小试管中进行稀释。）

160ng/L

5号标准品

120P1的原倍标准品加入120u1标准品稀释液

80ng/L

4号标准品

120u1的5号标准品加入120u1标准品稀释液

40ng/L

3号标准品

120u1的4号标准品加入120n1标准品稀释液

20ng/L

2号标准品

120P1的3号标准品加入120u1标准品稀释液

lOng/L

1号标准品

120Pl的2号标准品加入120u1标准品稀释液

.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

.加样：］）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗IDO抗体，链霉亲和素-HRP,只加显色剂AB和终止液，其余各步操作相同;2）标准品孔:加入标准品50uL链霉亲和素-HRP50U1（标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加）；3）待测样品孔：加入样本40uL然后各加入抗IDO抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。

.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用。

.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

.显色：每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50U1,轻轻震荡混匀，3