血清蛋白电泳-醋纤电泳、圆盘电泳实用全套.pptVIP

血清蛋白电泳(diànyǒnɡ)-醋纤电泳(diànyǒnɡ)、圆盘电泳(diànyǒnɡ);带电粒子在电场中移动的现象称为电泳。

电泳技术(jìshù)即是利用样品中各种带电粒子的带电性质、分子大小、形状等的差异，在电场中的迁移速度不同，从而对样品分子进行分离、鉴定、纯化和制备。

在生物医学领域，该技术(jìshù)多用于分离，纯化、鉴定蛋白质、核酸等大分子物质。;电泳(diànyǒnɡ)的分类;掌握电泳(diànyǒnɡ)法分离血清蛋白质的原理

掌握血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳(diànyǒnɡ)的操作方法及临床意义;本实验是以醋酸纤维素薄膜作为支持(zhīchí)体的区带电泳。

方法是将少量新鲜血清用点样器点在浸有缓冲液的乙酸纤维素薄膜上，薄膜两端经过滤纸与电泳槽中缓冲液相连，所用缓冲液pH值为8.6，血清蛋白质在此缓冲液中均带负电荷，在电场中向正极泳动。;醋酸纤维素膜：该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。该薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附(xīfù)现象等优点;蛋白质名称;经醋酸纤维(cùsuānxiānwéi)素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度分为5条区带，从正极端依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ球蛋白，经染色可计算出各蛋白质的百分含量。;1.实验材料：未溶血的人血清

2.实验试剂：

巴比妥缓冲液氨基黑10B0.5％染色(rǎnsè)液

漂洗液透明液

3.实验器材：

醋酸纤维薄膜（2×8cm）

常压电泳仪镊子

点样器玻棒

粗滤纸培养皿

吸量管直尺及铅笔;第二十八页，共29页。

电流不宜过大，以防止薄膜干燥，电泳图谱出现条痕。

待膜完全浸透（约半小时）后取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时(tóngshí)分辨出光滑面和粗糙面。

2．垂直板式电泳：聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳；

加蒸馏水至100ml

电泳完毕立即取出薄膜，直接浸入染色液中，染色5min。

三、实验(shíyàn)原理

待膜完全浸透（约半小时）后取出，夹在清??的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时(tóngshí)分辨出光滑面和粗糙面。

点样后电泳槽一定要密闭。

第二十六页，共29页。

点样器玻棒

醋酸纤维薄膜（2×8cm）

点样（关键(guānjiàn)）

每个槽上都有一根可移动(yídòng)的横杆，纱布的一头搭在横杆上，另一头浸入缓冲液中，形成了纱布桥。

血清蛋白电泳(diànyǒnɡ)-醋纤电泳(diànyǒnɡ)、圆盘电泳(diànyǒnɡ);电泳槽的准备

电泳槽有两个互相隔离的槽，各自装有缓冲液，接不同的电极，红色为正极，黑色为负极。每个槽上都有一根可移动(yídòng)的横杆，纱布的一头搭在横杆上，另一头浸入缓冲液中，形成了纱布桥。;2.点样（关键(guānjiàn)）

取出浸透的薄膜，平放在滤纸上(无光泽面向上)，用滤纸轻轻吸去多余的缓冲液，薄膜的粗糙面向上平放在点样模版上，底边对齐，点样区距负极1.5cm。点样时，用磨光的玻片蘸取血清后，均匀的涂抹在点样区，使血清完全渗透至薄膜内，形成一定宽度、粗细均匀的直线。（见图）;3.电泳

将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上。要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂，使膜平衡10min。

连接(liánjiē)好电泳仪。在室温下电泳，打开电源开关，电压160v，60min。;4.染色

电泳完毕立即取出薄膜，直接浸入染色液中，染色5min。

5.漂洗

用漂洗液漂洗，不停摆动薄膜条，每10min左右换一次液，连续更换数次，直至背景颜色脱去。将膜夹在干净滤纸中，吸去多余溶液。

操作(cāozuò)中，注意控制染色和漂洗的时间，防止背景过深或某些区带太浅。;6.记录和分析实验结果(jiēguǒ)

漂洗完毕后将薄膜取出,放在滤纸上。将薄膜上的5条色带根据其颜色深浅、形状、大小及相对位置进行描述、记录在实验本上，并判断分析其结果(jiēguǒ)。;血浆蛋白是血浆最主要(zhǔyào)的