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细胞库建立标准-范本模板

第一章总则

1.1目的与意义

为规范本机构细胞库（以下简称“细胞库”）的建立、管理和操作流程，确保所保存细胞的质量、安全性和可追溯性，特制定本标准。本标准旨在为细胞的长期稳定存储、科学研究、临床应用（如适用）等提供标准化的操作指引和质量保障，确保细胞资源的可持续利用和研究结果的可靠性。

1.2适用范围

本标准适用于本机构内各类细胞库的建立过程，包括但不限于用于基础研究、药物研发、生物技术产品生产以及（在符合相关法规前提下）临床前研究的细胞系、原代细胞等的收集、培养、鉴定、冻存、复苏、存储和分发。具体细胞类型可根据实际情况在本标准基础上制定补充细则。

1.3基本原则

细胞库的建立应遵循科学性、规范性、安全性、可追溯性和保密性原则。所有操作均需符合国家相关法律法规及伦理要求，并严格执行标准操作规程（SOP）。

第二章细胞库建立的准备与规划

2.1细胞来源与背景信息

2.1.1用于建库的细胞应有明确、合法的来源。对于人类细胞，必须遵守伦理规范，获得必要的知情同意。

2.1.2详细记录细胞的背景信息，包括但不限于：细胞名称（学名及常用名）、供体信息（物种、品系、性别、年龄、健康状况等，如适用）、分离或获取日期、原代培养代数（如适用）、供者相关的临床信息（如适用且符合伦理）、以及任何已知的遗传修饰或特殊特性。

2.1.3对引入的细胞，需索取其质量证明文件（如检测报告、鉴定证书等），并进行严格的入库前评估。

2.2建库方案制定

2.2.1根据细胞类型、预期用途及规模，制定详细的细胞库建立方案。方案应包括但不限于：细胞培养与扩增策略、质量控制检测项目与标准、冻存方案、复苏验证方案、存储条件、标识系统、文件记录体系等。

2.2.2对于需建立主细胞库（MCB）和工作细胞库（WCB）两级库的情况，应明确两级库的功能定位、制备流程、检测要求及层级关系。

2.3设施与设备要求

2.3.1实验室环境：细胞操作应在符合相应生物安全级别的洁净实验室中进行，如细胞培养室需具备适当的空气净化系统（如层流超净工作台、生物安全柜）、温湿度控制及监测系统。

2.3.2仪器设备：配备满足细胞培养、检测、冻存和存储需求的合格仪器设备，主要包括：

*细胞培养设备：CO?培养箱、生物安全柜/超净工作台、倒置显微镜等。

*检测设备：根据检测项目需求配置，如PCR仪、流式细胞仪、酶标仪、凝胶成像系统等。

*冻存与存储设备：程序降温仪、超低温冰箱（-80℃）、液氮罐（气相或液相）等。

*其他辅助设备：离心机、移液器、高压灭菌器、纯水系统等。

2.3.3所有仪器设备应建立台账，定期进行维护、校准和性能验证，并保留相关记录。

2.3.4试剂与耗材：使用经质量验证的细胞培养基、血清、胰蛋白酶等试剂，以及无菌培养器皿、冻存管等耗材。优先选择有质量保证的商品化产品，并对其批次质量进行必要的检测或验证。

2.4人员资质与培训

2.4.1参与细胞库建立的人员应具备相应的专业背景和技能。

2.4.2所有人员必须经过严格的岗前培训，内容包括本标准、相关SOP、仪器操作、生物安全及应急处理等，并通过考核后方可上岗。

2.4.3建立人员健康档案，定期进行健康检查。

第三章细胞的分离、培养与扩增

3.1细胞分离（如适用）

对于原代细胞，应根据其类型选择合适的分离方法（如酶消化法、机械分离法等），严格无菌操作，记录分离过程及关键参数。

3.2细胞培养与扩增

3.2.1严格按照经批准的SOP进行细胞接种、换液、传代等操作。

3.2.2密切观察细胞形态、生长状态及有无污染迹象，定期进行细胞计数和活力测定。

3.2.3控制细胞的传代次数或倍增水平，避免过度培养导致细胞生物学特性改变。明确MCB和WCB的最高限定传代水平。

3.2.4培养过程中，如发现细胞污染或异常，应立即终止操作，并按规定进行处理和记录。

第四章细胞的质量检测

4.1细胞身份鉴定

4.1.1STR分型鉴定：对于人类细胞系，应采用STR基因分型方法进行身份鉴定，并与已知数据库比对，确保细胞身份正确，排除交叉污染。

4.1.2其他方法：根据细胞类型，可采用核型分析、特异性标志物检测（如表面抗原、基因表达谱）等辅助鉴定方法。

4.2无菌性检测

4.2.1细菌、真菌检测：通过直接培养法（将细胞培养上清或裂解物接种至需氧、厌氧及真菌培养基）或指示细胞培养法进行检测，确保无细菌、真菌污染。

4.2.2支原体检测：采用培养法、PCR法或荧光染色法等至少一种经验证的方法进行支原体检测，结果应为阴性。

4.3病毒检测（如适用）

根据细胞来源、特性及预期用途，对可能存在的内源性或外源性病毒进行检测。常用方法包括病毒分离、PCR、抗体检测、免疫荧