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研究报告

DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.039737

引用格式:陈智恒,周灿,韦佐权,等.谷氨酰胺转氨酶耐热突变体在茂原链霉菌中的表达及酶学性质分析[J].食品与发酵工业,

2025,51(10):9-16.CHENZhiheng,ZHOUCan,WEIZuoquan,etal.Expressionofaheat-resistanttransglutaminasein

Streptomycesmobaraensisanditsenzymaticpropertyanalysis[J].FoodandFermentationIndustries,2025,51(10):9-16.

谷氨酰胺转氨酶耐热突变体在茂原链霉菌中的表达及酶学性质分析

1,21,21,21,21,231,2,3∗

陈智恒,周灿,韦佐权,谭亚梦,叶佳才,崔世修,刘松

1(江南大学,未来食品科学中心,江苏无锡,214122)2(江南大学生物工程学院,江苏无锡,214122)

3(嘉兴未来食品研究院,浙江嘉兴,314000)

摘要谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase)能催化蛋白质交联,被广泛用于食品加工。为促进其工业化

应用,该研究成功构建了高产耐热TGase的茂原链霉菌(Streptomycesmobaraensis)。首先,合成了TGase耐热突

变体TGm3表达框(1745bp),包含了S.mobaraensisTGase天然启动子、酶原区、终止子及TGm3编码序列(基于

链霉菌密码子偏好性优化)。其次,基于双交换同源重组将TGm3表达框整合至S.mobaraensis诱变菌smY2019-Δtg

的TGase基因位点,得到TGm3生产菌smY2019-TGm3。最后,分析了smY2019-TGm3发酵水平及TGm3酶学性

质。摇瓶发酵结果显示,smY2019-TGm3发酵至60h胞外TGase酶活力达到最大值(19.5U/mL)。经阳离交换

柱纯化后,TGm3比酶活力达到了41.76U/mg,是野生型TGase的1.7倍。酶学性质分析显示,TGm3的60℃半

衰期(60.6min)和最适反应温度(60℃)分别较野生型TGase提高32.6倍和10℃。上述结果表明,smY2019-

TGm3能高效合成耐热TGase,具有一定的工业化应用潜力。

关键词茂原链霉菌;谷氨酰胺转氨酶;高效表达;热稳定性

[11]

转谷氨酰胺酶(EC2.3.2.13TGase)催化蛋白质到24.3min,是野生型TGase的12.2倍。本课题

肽链中谷氨酰胺残基和不同酰基受体之间形成ε-组此前通过脯氨酸扫描和蛋白质表面静电荷设计构

(γ-谷氨酰胺)异肽,导致蛋白质交联或被小分子修建了热稳定突变体TGm2(S2P-S23V-Y24N-E28T-

[1]

饰。微生物TGase最初从茂原链霉菌(StreptomycesS199A-A265P-A287P-K294L)和TGm3(S2P-S23V-

mobaraensis)中分离得到。与动植物来源的酶相比,