2025年PCR上岗证考试题及答案.docxVIP

2025年PCR上岗证考试题及答案

一、单选题

1.PCR反应中，引物的作用是（）

A.提供模板

B.激活Taq酶

C.提供3’-OH末端，引导DNA合成

D.稳定反应体系

答案：C

解析：引物是一小段单链DNA或RNA，它可以与模板DNA的特定区域互补配对，为DNA聚合酶提供3’-OH末端，引导DNA合成。模板是待扩增的DNA，而不是引物，A选项错误；Taq酶的激活不需要引物，B选项错误；引物的主要作用不是稳定反应体系，D选项错误。

2.下列哪种物质不是PCR反应体系的组成成分（）

A.dNTP

B.引物

C.核酸染料

D.TaqDNA聚合酶

答案：C

解析：PCR反应体系通常包括模板DNA、dNTP（脱氧核苷三磷酸）、引物、TaqDNA聚合酶和缓冲液等。核酸染料是用于电泳后染色观察PCR产物的，不是PCR反应体系的组成成分，C选项符合题意。

3.PCR反应的变性温度一般为（）

A.55℃左右

B.72℃左右

C.94-95℃

D.37℃左右

答案：C

解析：PCR反应的变性步骤是使双链DNA解旋为单链，需要较高的温度，一般为94-95℃。55℃左右通常是退火温度，72℃左右是延伸温度，37℃一般不是PCR反应的特征温度，C选项正确。

4.以下关于TaqDNA聚合酶的描述，错误的是（）

A.具有5’-3’聚合酶活性

B.具有3’-5’外切酶活性

C.耐高温

D.可用于PCR反应

答案：B

解析：TaqDNA聚合酶具有5’-3’聚合酶活性，能够在引物的引导下合成新的DNA链，A选项正确；它耐高温，适合PCR反应中高温变性的步骤，C选项正确；是PCR反应常用的酶，D选项正确。但TaqDNA聚合酶不具有3’-5’外切酶活性，缺乏校对功能，B选项错误。

5.在PCR实验中，防止交叉污染的措施不包括（）

A.不同操作区域分开

B.严格遵守操作规程

C.重复使用一次性耗材

D.使用带滤芯的枪头

答案：C

解析：为防止PCR实验中的交叉污染，应将不同操作区域分开，如试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区和产物分析区等，A选项属于防止交叉污染的措施；严格遵守操作规程可以减少污染的机会，B选项正确；使用带滤芯的枪头可以防止气溶胶污染，D选项正确。而重复使用一次性耗材会增加交叉污染的风险，C选项不属于防止交叉污染的措施。

6.实时荧光定量PCR技术中，常用的荧光标记方法不包括（）

A.SYBRGreenI荧光染料法

B.TaqMan探针法

C.MolecularBeacon探针法

D.放射性标记法

答案：D

解析：实时荧光定量PCR技术中常用的荧光标记方法有SYBRGreenI荧光染料法、TaqMan探针法和MolecularBeacon探针法等。SYBRGreenI能与双链DNA结合发出荧光，TaqMan探针和MolecularBeacon探针利用荧光共振能量转移原理进行检测。而放射性标记法有放射性危害，且不用于实时荧光定量PCR，D选项符合题意。

7.PCR反应中，dNTP的作用是（）

A.提供能量

B.提供合成DNA的原料

C.稳定反应体系

D.激活引物

答案：B

解析：dNTP（脱氧核苷三磷酸）包括dATP、dTTP、dCTP和dGTP，它们是合成DNA的原料，在DNA聚合酶的作用下，dNTP中的脱氧核苷酸依次连接形成新的DNA链。dNTP不是主要提供能量，A选项错误；其主要作用不是稳定反应体系，C选项错误；也不能激活引物，D选项错误。

8.以下哪种因素不会影响PCR反应的特异性（）

A.引物的特异性

B.退火温度

C.dNTP的浓度

D.模板的纯度

答案：C

解析：引物的特异性直接影响PCR反应的特异性，如果引物与非靶序列结合，会导致非特异性扩增，A选项不符合题意；退火温度不合适可能会使引物与模板的结合特异性降低，出现非特异性扩增，B选项不符合题意；模板的纯度也会影响PCR反应的特异性，杂质可能会干扰引物与模板的结合或影响酶的活性，D选项不符合题意。dNTP的浓度主要影响PCR反应的产量，而不是特异性，C选项符合题意。

9.实时荧光定量PCR中，Ct值的含义是（）

A.达到荧光阈值时的循环数

B.荧光信号的强度

C.反应的终止循环数

D.模板的起始浓度

答案：A

解析：在实时荧光定量PCR中，Ct值（Cyclethreshold）是指荧光信号达到设定的荧光阈值时所经历的循环数。它与模板的起始浓度呈负相关，可以用于定量分析。荧光信号的强度不是Ct值的含义，B选项错误；Ct值不是反应的终止循环数，C选项错误；Ct值是用于推算模板起始浓度的指标，而不是模板的起始浓度本身，D选项错误。